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649436583銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
提取大腸桿菌質(zhì)粒 已有2人參與
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首先我從高中畢業(yè)后再沒接觸過生物，對什么質(zhì)粒、大腸桿菌是什么怎么做完全不清楚，公司老板分配給我的任務是用天根小提中量試劑盒提取大腸桿菌質(zhì)粒，我全是從網(wǎng)上找的方法，希望各位大神幫幫忙我應該注意些什么，怎么操作。。。  先是配制LB培養(yǎng)基然后加氨芐青霉素，公司買的是生工的菌液加進去，昨天下午3點在搖床上開始震蕩，接下來收集細菌和以下的步驟完全看不懂了，希望大神們通俗講解一下�？紤]到明后兩天是周末，如果周一再做的話，今天需要怎么處理 拜謝各位  |
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飛約瘋?cè)嗽?/a>
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649436583(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-06-20 10:27:34
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649436583(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-06-20 10:27:34
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(一)細菌的收獲和裂解 1.收獲 1)將2ml含相應抗生素的LB加入到容量為15ml 并通氣良好(不蓋緊)的試管中，然后接入一單菌落，于30℃劇烈振搖下培養(yǎng)過夜。 2)將1.5ml培養(yǎng)物倒入微量離心管中，用微量離心機于4℃以12000g離心30秒，將剩余的培養(yǎng)物貯存于4℃。 3)吸去培養(yǎng)液，使細菌沉淀盡可能干燥。除去上清的簡便方法是用一次性使用的吸頭與真空管道相連，輕緩抽吸，并用吸頭接觸液面。當液體從管中吸出時，盡可能使吸頭遠離細菌沉淀，然后繼續(xù)用吸頭通過抽真空除去附于管壁的液滴。 2.堿裂解法 1)將細菌沉淀，所得重懸于100μl用冰預冷的溶液I中，劇烈振蕩。 溶液I 50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tris.Cl(pH8.0) 10mmol/LEDTA(pH8.0) 溶液I可成批配制，每瓶約100ml，在10lbf/in2(6.895×104Pa)高壓下蒸氣滅菌15分鐘，貯存于4℃。須確使細菌沉淀在溶液I中完全分散，將兩個微量離心管的管底部互相接觸震蕩，可使沉淀迅速分散。 |
2樓2014-06-20 10:12:03
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3樓2014-06-20 11:51:12
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649436583(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-06-20 16:41:21
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649436583(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-06-20 16:41:21
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昨天下午搖菌的啊，現(xiàn)在已經(jīng)提了吧。 1.搖菌。 2.用2mlEP管收集菌液，12000g離心1min。棄上清，加溶液一。 3.渦旋混勻，不要有菌塊。加溶液二，輕輕上下混勻8次左右。 3.加溶液三輕輕上下混勻8次左右。 4.12000g離心10min。 5.將上清過柱子，12000g離心30s。 6.加W1洗一次，加W2洗二次。 7.空離心，12000g離心1min。 8.加65度預熱的Euent30ul溶解。 9.電泳檢測濃度。 各試劑盒步驟應該大體差不多，所加溶液多少可能會有區(qū)別，請參照說明書。 純個人操作方法，純手打。 |
5樓2014-06-20 16:04:50
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