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往事F隨風(fēng)新蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于PCR引物設(shè)計(jì)的求助 已有3人參與
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鄙人新手一枚,很多東西都不懂,所以來 求助了。 PCR引物設(shè)計(jì)有什么技巧啊?之前也看了很多資料,關(guān)于PCR引物設(shè)計(jì)的原則,比如CG含量在40-60%,溫度在58-60,℃為宜等等初步判斷PCR一對(duì)引物的優(yōu)劣,但是我們一位師姐建議我們,說PCR引物設(shè)計(jì)時(shí),一點(diǎn)引物二聚體、錯(cuò)誤配對(duì)都不要有(我用的primer5.0軟件),但是我發(fā)現(xiàn)熊掌和魚往往不能兼得,考慮到CG,溫度等,一般設(shè)計(jì)時(shí)會(huì)出現(xiàn)二聚體,只是能值還是比較低的(δG<9),或者出現(xiàn)錯(cuò)誤配對(duì),如果考慮二聚體等,CG含量一般又比較低。在此我想向大神們請(qǐng)教下,這種情況下,我如何選擇呢?是不是在做熒光定量引物時(shí),一點(diǎn)二聚體什么的都不能有? |
新蟲 (小有名氣)
新蟲 (小有名氣)

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