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往事F隨風新蟲 (小有名氣)
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[求助]
關于PCR引物設計的求助 已有3人參與
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鄙人新手一枚，很多東西都不懂，所以來 求助了。 PCR引物設計有什么技巧��？之前也看了很多資料，關于PCR引物設計的原則，比如CG含量在40-60%，溫度在58-60,℃為宜等等初步判斷PCR一對引物的優(yōu)劣，但是我們一位師姐建議我們，說PCR引物設計時，一點引物二聚體、錯誤配對都不要有（我用的primer5.0軟件），但是我發(fā)現(xiàn)熊掌和魚往往不能兼得，考慮到CG，溫度等，一般設計時會出現(xiàn)二聚體，只是能值還是比較低的（δG<9），或者出現(xiàn)錯誤配對，如果考慮二聚體等，CG含量一般又比較低。在此我想向大神們請教下，這種情況下，我如何選擇呢？是不是在做熒光定量引物時，一點二聚體什么的都不能有？ |
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