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往事F隨風(fēng)新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于PCR引物設(shè)計(jì)的求助 已有3人參與
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鄙人新手一枚，很多東西都不懂，所以來(lái) 求助了。 PCR引物設(shè)計(jì)有什么技巧啊？之前也看了很多資料，關(guān)于PCR引物設(shè)計(jì)的原則，比如CG含量在40-60%，溫度在58-60,℃為宜等等初步判斷PCR一對(duì)引物的優(yōu)劣，但是我們一位師姐建議我們，說(shuō)PCR引物設(shè)計(jì)時(shí)，一點(diǎn)引物二聚體、錯(cuò)誤配對(duì)都不要有（我用的primer5.0軟件），但是我發(fā)現(xiàn)熊掌和魚(yú)往往不能兼得，考慮到CG，溫度等，一般設(shè)計(jì)時(shí)會(huì)出現(xiàn)二聚體，只是能值還是比較低的（δG<9），或者出現(xiàn)錯(cuò)誤配對(duì)，如果考慮二聚體等，CG含量一般又比較低。在此我想向大神們請(qǐng)教下，這種情況下，我如何選擇呢？是不是在做熒光定量引物時(shí)，一點(diǎn)二聚體什么的都不能有？ |
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