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RNA變性電泳PAGE，帶有重影 已有1人參與
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15%的變性 尿素聚丙烯酰胺凝膠電泳，樣品是總RNA，跑出來(lái)的電泳帶有重影，使用的條件是1XTBE，60V，電泳5h，使用的marker為非變性的marker，跑不會(huì)看是正常的。但是怎么其他目的帶也有重影呢？望各位蟲指點(diǎn)。 同時(shí)也跑了15%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，條件一樣，很正常，帶分得很開，樣品沒(méi)有問(wèn)題。 變性尿素聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)果： 20140613-RNA-變性PAGE.jpg |
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biostar2009
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【答案】應(yīng)助回帖
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84146922(myprayer代發(fā)): 金幣+3, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-02 12:17:31
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初手干這個(gè)，這是最常見(jiàn)的問(wèn)題 urea極易析出，不斷的在從膠里面擴(kuò)散出來(lái)，聚集在well里面，loading buffer的密度不如urea高，urea實(shí)在是太高了，所以u(píng)rea-PAGE上樣前，注意是剛剛上樣前，要用注射器使命的吹孔，把尿素吹出來(lái)。同時(shí)上樣速度要快，因?yàn)槟蛩剡�在析出，尤其是well兩側(cè)的析出，時(shí)間長(zhǎng)了樣品即便上進(jìn)去是好好的，也會(huì)被抬升和壓成錐形。 |
3樓2014-07-02 10:14:01
4樓2014-07-02 19:37:47
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