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xingyun789金蟲 (小有名氣)
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[求助]
有關(guān)原核表達(dá)載體構(gòu)建方面的問題 已有1人參與
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| 我將我的目的片段用BamHI和NotI進(jìn)行雙酶切，pET32a載體也是用這兩個(gè)酶進(jìn)行雙酶切，然后將我的目的片段同這個(gè)載體進(jìn)行連接，將連接的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化BL21感受態(tài)，然后涂平板，平板上長出了單菌落，挑取單菌落進(jìn)行培養(yǎng)，然而進(jìn)行菌落PCR的時(shí)候，并沒有出現(xiàn)相應(yīng)的目的條帶。我用的是T7通用引物以及特異引物進(jìn)行的檢測，其中，T7通用引物用的退火溫度是58度。出現(xiàn)這樣的原因，還望各位能給解答一下，謝謝。。。 |
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 核酸生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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xingyun789
金蟲 (小有名氣)
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2樓2014-07-03 09:54:54
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