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hhxittxs新蟲(chóng) (初入文壇)
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PBⅠ121質(zhì)粒雙酶切問(wèn)題 已有4人參與
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本人做PBⅠ121質(zhì)粒雙酶切，內(nèi)切酶為BamHⅠ和HindⅢ，切了24h，這是PBⅠ121雙酶切凝膠電泳圖，做了個(gè)重復(fù)，1,3是酶切前的 2,4分別是對(duì)應(yīng)酶切后的。2,4下是有兩條帶的（紅色圈圈里面），不仔細(xì)看看不出來(lái)。marker為2000，這能表示切開(kāi)了嗎？ 本人新手，金幣不多，各位大神樂(lè)善好施幫個(gè)忙嘞！ 1.jpg |
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hhxittxs(myprayer代發(fā)): 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-05 18:16:06
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| 為什么不用5000marker做標(biāo)記呢？如果電泳圖上顯示的酶切后的兩個(gè)片段之和大小與酶切之前的大小差不多一致，并且切下的短條帶大小是目的帶大小，差不多可以確定是正確的，進(jìn)一步驗(yàn)證的話(huà)就送去測(cè)序吧。另外看你的電泳圖中條帶很清晰但是亮度不太大，如果質(zhì)粒濃度可以的話(huà)就是電泳液需要換一下了，這樣切下的條帶可能會(huì)明顯些 |
2樓2014-07-05 08:02:04
hhxittxs
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-07-07 16:24:22
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| 用一個(gè)大的MARKER不是看得更清楚點(diǎn)嗎？比如用10k的。PBI121這個(gè)載體我們以前常用的，拷貝數(shù)很低，所以切的時(shí)候盡量要多切，最好不要用水補(bǔ)足了。PBI121有8k多，用BamHI/HindIII切下來(lái)大約600bp片段。看你電泳圖掉的片段不明顯，只能說(shuō)是沒(méi)切完全。酶切時(shí)間可以縮短，但要保證限制酶的量足夠。這個(gè)載體本來(lái)就不太好切，只能說(shuō)有些細(xì)節(jié)注意一下。 |
6樓2014-07-07 15:08:44
鬼羽帝魂
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j6918936
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