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nisiying0701木蟲 (正式寫手)
stan
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[求助]
蛋白中巰基和二硫鍵的測(cè)定 已有2人參與
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測(cè)定總巰基含量時(shí)，15 mg蛋白樣品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 緩沖液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。測(cè)定自由巰基含量時(shí)，15 mg樣品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 緩沖液中，而后加入50 μL Ellman 試劑 （DTNB, 即5,5-二硫基雙2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 緩沖液，4 mg/mL），在25℃條件下保溫反應(yīng)60 min, 離心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 處測(cè)定吸光值，以含Ellman 試劑的Tris-Gly 緩沖液為空白對(duì)照。 巰基含量的計(jì)算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去試劑空白后樣品的吸光度值 D—稀釋倍數(shù) C—樣品濃度（mg/mL） 請(qǐng)教各位大神，這種方法中稀釋倍數(shù)（D）和樣品濃度（C）是多少？怎么得出的？萬(wàn)分感謝�。。�！ |
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5樓2014-11-10 19:34:05
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