 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3396 | 回復(fù): 14 | ||
biology-girl新蟲 (正式寫手)
|
[求助]
RNA 反轉(zhuǎn)錄后依然有內(nèi)含子序列？ 已有3人參與
|
|
| 如題，最近克隆一個(gè)基因，但是有內(nèi)含子，遂提取RNA 后反轉(zhuǎn)錄，可是測(cè)序結(jié)果回來后發(fā)現(xiàn)還是有內(nèi)含子序列。請(qǐng)問各位大俠 設(shè)施怎么回事？ 是我的方法操作有問題？還是NCBI 上公布的有問題（此基因以前沒人克隆過） PS：沒人克隆過那個(gè)基因，那NCBI 上的CDS 區(qū) 是怎么得來的？ 是不是NCBI上的不對(duì)呀？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有223人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- RNA 反轉(zhuǎn)錄后 還有內(nèi)含子？
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 反轉(zhuǎn)錄RNA時(shí)出現(xiàn)基因組DNA的原因有哪些？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- RNA含量低，反轉(zhuǎn)錄成功，可以用于PCR驗(yàn)證？？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 測(cè)序結(jié)果與NCBI有差別，求解釋！
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 已知一個(gè)基因的DNA序列，怎么得到它的cDNA序列，我想做RT-PCR
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 大牛來指點(diǎn)下啊~CDS區(qū)到底含不含內(nèi)含子？看了相關(guān)的帖反而把我搞糊涂了
已經(jīng)有44人回復(fù)
- 反轉(zhuǎn)錄后擴(kuò)增有好幾條帶
已經(jīng)有8人回復(fù)
- RNA提取與反轉(zhuǎn)錄
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 反轉(zhuǎn)錄后用cDNA做模板擴(kuò)不出目的基因怎么辦？？？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 基因序列比對(duì) 內(nèi)含子比對(duì)
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 對(duì)于一個(gè)沒有內(nèi)含子的基因，請(qǐng)問用基因組或cDNA作為模板跑PCR對(duì)于結(jié)果有什么影響嗎？
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 如何處理大量的fasta格式的rna序列
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 關(guān)于RNA反轉(zhuǎn)錄
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 提取RNA后，反轉(zhuǎn)錄后用β-actinpcr很多條帶
已經(jīng)有20人回復(fù)
- rna終于提取出來了，可是反轉(zhuǎn)錄pcr（rt pcr）沒有條帶
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 請(qǐng)教RNA提取高手：反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR)中DNA的去除
已經(jīng)有18人回復(fù)
- RNA濃度只有幾十ng/ul，不知道可不可以反轉(zhuǎn)錄做RT（在線急等）
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】總RNA反轉(zhuǎn)錄出的cDNA 怎樣檢測(cè)出來
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于引物設(shè)計(jì)的問題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】反轉(zhuǎn)錄時(shí)該選用oligo dT還是 隨機(jī)6引物？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】是否所有的基因都有內(nèi)含子？
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA電泳圖
已經(jīng)有14人回復(fù)
luwei13566
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 184 (高中生)
- 金幣: 4351.4
- 散金: 97
- 紅花: 35
- 帖子: 641
- 在線: 261.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 2380655
- 注冊(cè): 2013-03-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+6, 鼓勵(lì)交流！ 2014-07-19 16:49:17
gyesang: 回帖置頂 2014-07-27 20:59:55
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+6, 鼓勵(lì)交流！ 2014-07-19 16:49:17
gyesang: 回帖置頂 2014-07-27 20:59:55
|
1.你的基因上應(yīng)該不止一個(gè)內(nèi)含子吧。你提出來的RNA是只保留了其中的幾個(gè)內(nèi)含子還是所有的內(nèi)含子全部存在？如果內(nèi)含子全部存在我就有理由懷疑你的RNA中是否有基因組的污染。你首先需要排除這個(gè)可能 2.如果只是一部分內(nèi)含子存在那你得排除沒有正常剪切這種情況。你說的挑了十幾個(gè)重組菌提了質(zhì)粒后測(cè)序是在一個(gè)平板上長(zhǎng)的轉(zhuǎn)化子嗎？你的平板上長(zhǎng)了有多少個(gè)轉(zhuǎn)化子？你這種情況挑十幾個(gè)還是太少了。要有說服力至少得挑50個(gè)—100個(gè)吧。然后算一個(gè)你這種帶內(nèi)含子的比例，另外你還得再提一次RNA重復(fù)1—2次試驗(yàn)。一般不充分的剪切和你的培養(yǎng)條件還是有關(guān)系的，如果可以的話試著換一下培養(yǎng)條件試試。 3.如果把不正常剪切這種情況排除，證明你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是合理的。那你下一步還需要嘗試質(zhì)疑NCBI上已提交序列的合理性，首先就是功能對(duì)比驗(yàn)證，用融合PCR除去那個(gè)內(nèi)含子得到和NCBI上一致的基因作為你的這個(gè)帶內(nèi)含子基因的對(duì)照，之后一起表達(dá)蛋白進(jìn)行功能驗(yàn)證，如果你的基因有功能而網(wǎng)上的基因沒功能，那你就有推翻NCBI上那個(gè)序列的證據(jù)了。如果兩個(gè)蛋白都有功能但是有差異的話，這就是個(gè)更有意思的結(jié)論了，從這個(gè)結(jié)果又可以延伸出一個(gè)課題。如果你不做功能的話，可以用個(gè)定量PCR從轉(zhuǎn)錄水平去驗(yàn)證。你想推翻現(xiàn)在已有的結(jié)果就必須拿出有力的證據(jù)。 4.你的這個(gè)結(jié)果只要證據(jù)充分而且你研究的這個(gè)基因的意義明顯一篇高分SCI是跑不了的，如果只是提個(gè)RNA，測(cè)個(gè)序列算個(gè)比例的話，sci很困難。 |
6樓2014-07-19 13:12:55
2樓2014-07-19 09:21:52
yuehedou
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 26 (小學(xué)生)
- 金幣: 2171.4
- 紅花: 2
- 帖子: 215
- 在線: 190.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 1996646
- 注冊(cè): 2012-09-12
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物信息學(xué)
3樓2014-07-19 10:43:11
biology-girl
新蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 33 (小學(xué)生)
- 金幣: 915.7
- 散金: 23
- 紅花: 3
- 帖子: 959
- 在線: 131.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 2403242
- 注冊(cè): 2013-04-06
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
4樓2014-07-19 10:56:34
biology-girl
新蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 33 (小學(xué)生)
- 金幣: 915.7
- 散金: 23
- 紅花: 3
- 帖子: 959
- 在線: 131.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 2403242
- 注冊(cè): 2013-04-06
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
5樓2014-07-19 10:57:57
biology-girl
新蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 33 (小學(xué)生)
- 金幣: 915.7
- 散金: 23
- 紅花: 3
- 帖子: 959
- 在線: 131.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 2403242
- 注冊(cè): 2013-04-06
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
7樓2014-07-20 13:56:56
biology-girl
新蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 33 (小學(xué)生)
- 金幣: 915.7
- 散金: 23
- 紅花: 3
- 帖子: 959
- 在線: 131.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 2403242
- 注冊(cè): 2013-04-06
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
8樓2014-07-20 13:57:02
luwei13566
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 184 (高中生)
- 金幣: 4351.4
- 散金: 97
- 紅花: 35
- 帖子: 641
- 在線: 261.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 2380655
- 注冊(cè): 2013-03-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-07-20 21:24:39
gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-07-20 21:24:39
|
1.有沒有污染先看你的測(cè)序結(jié)果，你的基因有幾個(gè)內(nèi)含子？而你的測(cè)序結(jié)果又保留了幾個(gè)內(nèi)含子？如果你的基因里包含了NCBI上所預(yù)測(cè)的所有內(nèi)含子那基因組污染的可能性非常大。如果只包含一個(gè)或一部分內(nèi)含子，那基因組污染的可能性就已經(jīng)排除了。瓊脂糖膠是有個(gè)分辨率的，你肉眼看不到并不代表就沒有。 2.你RT-PCR做完是連T載體嗎？怎么快100個(gè)轉(zhuǎn)化子里才這么點(diǎn)陽性，你用的是什么taq酶，連接體系是多少？基因與載體摩爾比又是多少？盡管你是分幾次做的。但是你的陽性太少就沒法排除偶然的錯(cuò)誤剪切導(dǎo)致的mRNA前體的可能性。 |
9樓2014-07-20 14:26:53
biology-girl
新蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 33 (小學(xué)生)
- 金幣: 915.7
- 散金: 23
- 紅花: 3
- 帖子: 959
- 在線: 131.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 2403242
- 注冊(cè): 2013-04-06
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
10樓2014-07-21 09:21:07
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 biology-girl 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 能源材料化學(xué)課題組招收碩士研究生8-10名 +4 | 脫穎而出 2026-03-16 | 13/650 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿中國(guó)海洋大學(xué)，生物學(xué)，301分，求調(diào)劑 +5 | 1孫悟空 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
[考研] 294求調(diào)劑材料與化工專碩 +14 | 陌の森林 2026-03-18 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑，一志愿華南理工大學(xué)071005 +5 | ioodiiij 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | 18889395102 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑 +7 | 為學(xué)666 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 324分 085600材料化工求調(diào)劑 +3 | llllkkkhh 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)求調(diào)劑 +3 | 臨澤境llllll 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料考研調(diào)劑 +3 | xwt。 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿中海洋材料工程專碩330分求調(diào)劑 +7 | 小材化本科 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿天大材料與化工（085600）總分338 +5 | 蔡大美女 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué) 305求調(diào)劑 +4 | FY_yy 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +3 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0854可跨調(diào)劑，一作一項(xiàng)核心論文五項(xiàng)專利，省、國(guó)級(jí)證書40+數(shù)一英一287 +8 | 小李0854 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 298-一志愿中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)-求調(diào)劑 +7 | 手機(jī)用戶 2026-03-17 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 總分331 +3 | ZY-05 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +3 | 妮妮ninicgb 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 東南大學(xué)364求調(diào)劑 +5 | JasonYuiui 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +4 | 奇點(diǎn)0314 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 本科南京大學(xué)一志愿川大藥學(xué)327 +3 | 麥田耕者 2026-03-14 | 3/150 |
|