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biology-girl新蟲 (正式寫手)
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RNA 反轉錄后依然有內含子序列？ 已有3人參與
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| 如題，最近克隆一個基因，但是有內含子，遂提取RNA 后反轉錄，可是測序結果回來后發(fā)現(xiàn)還是有內含子序列。請問各位大俠 設施怎么回事？ 是我的方法操作有問題？還是NCBI 上公布的有問題（此基因以前沒人克隆過） PS：沒人克隆過那個基因，那NCBI 上的CDS 區(qū) 是怎么得來的？ 是不是NCBI上的不對呀？ |
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luwei13566
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【答案】應助回帖
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gyesang: 金幣+3, 鼓勵回帖交流！ 2014-07-20 21:24:39
gyesang: 金幣+3, 鼓勵回帖交流！ 2014-07-20 21:24:39
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1.有沒有污染先看你的測序結果，你的基因有幾個內含子？而你的測序結果又保留了幾個內含子？如果你的基因里包含了NCBI上所預測的所有內含子那基因組污染的可能性非常大。如果只包含一個或一部分內含子，那基因組污染的可能性就已經(jīng)排除了。瓊脂糖膠是有個分辨率的，你肉眼看不到并不代表就沒有。 2.你RT-PCR做完是連T載體嗎？怎么快100個轉化子里才這么點陽性，你用的是什么taq酶，連接體系是多少？基因與載體摩爾比又是多少？盡管你是分幾次做的。但是你的陽性太少就沒法排除偶然的錯誤剪切導致的mRNA前體的可能性。 |
9樓2014-07-20 14:26:53
2樓2014-07-19 09:21:52
yuehedou
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3樓2014-07-19 10:43:11
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4樓2014-07-19 10:56:34
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