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wuweifeng710木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
CTAB法提DNA，沉淀DNA有漂亮的絮狀物，提取完電泳卻什么都沒(méi)有，大家來(lái)幫幫忙 已有8人參與
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最近一直在用CTAB法提DNA，沉淀DNA有漂亮的絮狀物，用75%的乙醇洗沉淀2次，用TE溶解后，37攝氏度水浴30min，表現(xiàn)為溶液粘稠，完后電泳卻什么都沒(méi)有，連點(diǎn)樣孔都沒(méi)有亮，估計(jì)是多糖污染，但為什么點(diǎn)樣孔一點(diǎn)亮都沒(méi)有，有點(diǎn)marker，marker表現(xiàn)很正常，我沉淀完dna的后續(xù)操作是這樣的 1.用異丙醇沉淀DNA，出現(xiàn)絮狀物（有用過(guò)無(wú)水乙醇沉淀，也是有沉淀，電泳完什么也沒(méi)看到），4℃下5000rpm離心5分鐘 2.棄上清，用75%乙醇洗沉淀，5000rpm離心1min，重復(fù)1次 3.在超凈工作臺(tái)抽干乙醇（大約15分鐘左右） 4.TE溶解，加少許RNase水浴30~60min 5.跑膠（有嘗試水浴完直接跑膠，也有在室溫下或4℃下過(guò)夜后跑膠） 大家來(lái)幫幫忙！幫我找找原因，謝謝大家了 |
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10樓2014-07-23 09:51:40
【答案】應(yīng)助回帖
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西門(mén)吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-07-23 12:10:04
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西門(mén)吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-07-23 12:10:04
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TE溶解或RNase處理之后有測(cè)濃度么？是否正常？ TE溶液是新配制的么？pH還正常不？ 你提的是植物細(xì)胞么？CTAB提出來(lái)的DNA很容易成團(tuán)，不易溶解，可以試試增加溶解時(shí)間。能夠看到絮狀或絲狀說(shuō)明DNA沉淀是沒(méi)問(wèn)題的，建議之前提的DNA如果沒(méi)有扔掉的話在37°多放幾天，然后再跑一下膠試試。 |
6樓2014-07-23 02:30:05
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2樓2014-07-22 20:33:46
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9樓2014-07-23 09:49:38
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