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smileface126鐵蟲 (初入文壇)
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[交流]
考馬斯亮藍(lán)法測試中的幾個問題 已有1人參與
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關(guān)于考馬斯亮藍(lán)法，有幾個問題想請教一下 1、測試條件酸堿性影響大嗎，看有說是在酸性條件下測試。 2、將含蛋白質(zhì)樣品消化溶解后一定要離心取清液嗎 3、吸光度測試范圍。據(jù)說吸光度高測定濃度偏離標(biāo)準(zhǔn)曲線，又從一個文章中看到測試范圍在0.1-0.05，是不是也不至于這么低呢 |
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hsd3521
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
zybpxy: 食品EPI+1 2014-07-27 22:04:29
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
zybpxy: 食品EPI+1 2014-07-27 22:04:29
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1. 高濃度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、丙酮、硫酸銨和去污劑時測定有干擾。緩沖液濃度過高時，改變測定液pH值會影響顯色。之所以選擇酸性是因為G-250在酸性溶液中為棕紅色，當(dāng)它與蛋白質(zhì)通過范德華鍵結(jié)合后，變?yōu)樗{(lán)色。 2.該方法是測定可溶性蛋白，必須取上清液，沉淀會影響讀數(shù) 3.蛋白質(zhì)一定濃度范圍內(nèi)符合比爾定律，基于紫外可見光分光光度計的靈敏度，最好是將蛋白濃度調(diào)制最大吸光度在0.8以下進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，也就是后面的文獻(xiàn)比較靠譜些，蛋白濃度大，你會發(fā)現(xiàn)你繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線后面基本平行，變成了一條拋物線 個人解釋，如不對請指正，謝謝 |
2樓2014-07-27 19:36:27
smileface126
鐵蟲 (初入文壇)
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3樓2014-07-27 21:25:12
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