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mayibuku木蟲 (小有名氣)
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[求助]
用合成多肽跑tricine SDS-PAGE 膠，但是看不見條帶 已有4人參與
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如題，多肽是自己合成的，分子量5K，跑tricine SDS-PAGE完全看不到條帶，但是我用的marker最下面一條帶是3.4K的多肽，marker跑膠條帶就非常清楚，用的是考馬斯亮藍染色 我想問下多肽跑膠和蛋白有什么區(qū)別嗎？為什么marker的多肽能看到，我自己的多肽就看不到呢？是不是多肽需要用很高的濃度才能看到條帶啊 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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多肽跑膠和蛋白的一個重要區(qū)別是對凝膠濃度的要求不同，多肽的分子量小組成其的氨基酸的數(shù)量小，所以多肽跑膠時需要的凝膠的交聯(lián)度要更高，否則在凝膠上呆不住，類似于電流短路。凝膠的交聯(lián)度高到一定程度，普通的聚丙烯酰胺凝膠就不足以應(yīng)對了，所以要用tricine SDS-PAGE。 普通的聚丙烯酰胺凝膠濃度與蛋白質(zhì)分離范圍的關(guān)系： 聚丙烯酰胺凝膠濃度（%T） 蛋白質(zhì)分離范圍/kd 5 36—200 6 30—200 8 20—175 10 15—150 12 10—100 15 6—50 另外，電泳中使用各種溶液也有差別。 請參考： Tricine–SDS-PAGE-Nature_Protrocols(2006).pdf http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=6121608 |
3樓2014-08-23 21:00:51
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4樓2014-10-07 17:21:54
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