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靜靜秋木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
Tricine膠應(yīng)該怎么跑？ 已有4人參與
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最經(jīng)在做小分子蛋白，試過(guò)了17%和Tricine膠，Tricine膠的效果更好，樓主果斷決定做Tricine膠，用的是Nature protein上面的配方，用的是兩層膠，沒(méi)有加尿素。電壓選用的是30V跑40-50min后改用130V跑至底部，放在4℃環(huán)境中電泳時(shí)間約為3h，用的是bio-rad的mini型的電泳槽。然后固定染色脫色，出現(xiàn)以下問(wèn)題： 1.買(mǎi)的是低分子多肽作為Marker，有5個(gè)條帶，最下面的兩個(gè)條帶有點(diǎn)拖尾且不清晰，有點(diǎn)彌散的現(xiàn)象，感覺(jué)上是沒(méi)有怎么分開(kāi)，最重要的，分子量根本對(duì)不上。 2.Marker總是會(huì)拖著臨近的樣品條帶，臨近Marker的條帶總是跑的很丑很丑。 3.8.8KDa以下的樣品條帶不清楚，當(dāng)然這個(gè)有可能是樣品的問(wèn)題，但是小分子確實(shí)沒(méi)有被分開(kāi)的感覺(jué)，不清楚。 樓主下一步的想法是確認(rèn)Marker應(yīng)該怎么跑的問(wèn)題，接著再確認(rèn)超小分子跑不開(kāi)的問(wèn)題，請(qǐng)牛人幫忙解決一下，需要在膠里面加尿素嗎？跑膠的電壓是不是太高了呢?bio-rad電泳槽是不是只能跑普通膠不能做小分子膠呢？ |
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焦慮
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靜靜秋
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4樓2013-06-03 17:51:32
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