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靜靜秋木蟲 (正式寫手)
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Tricine膠應(yīng)該怎么跑? 已有4人參與
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最經(jīng)在做小分子蛋白,試過了17%和Tricine膠,Tricine膠的效果更好,樓主果斷決定做Tricine膠,用的是Nature protein上面的配方,用的是兩層膠,沒有加尿素。電壓選用的是30V跑40-50min后改用130V跑至底部,放在4℃環(huán)境中電泳時(shí)間約為3h,用的是bio-rad的mini型的電泳槽。然后固定染色脫色,出現(xiàn)以下問題: 1.買的是低分子多肽作為Marker,有5個(gè)條帶,最下面的兩個(gè)條帶有點(diǎn)拖尾且不清晰,有點(diǎn)彌散的現(xiàn)象,感覺上是沒有怎么分開,最重要的,分子量根本對(duì)不上。 2.Marker總是會(huì)拖著臨近的樣品條帶,臨近Marker的條帶總是跑的很丑很丑。 3.8.8KDa以下的樣品條帶不清楚,當(dāng)然這個(gè)有可能是樣品的問題,但是小分子確實(shí)沒有被分開的感覺,不清楚。 樓主下一步的想法是確認(rèn)Marker應(yīng)該怎么跑的問題,接著再確認(rèn)超小分子跑不開的問題,請(qǐng)牛人幫忙解決一下,需要在膠里面加尿素嗎?跑膠的電壓是不是太高了呢?bio-rad電泳槽是不是只能跑普通膠不能做小分子膠呢? |

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
木蟲 (正式寫手)

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