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靜靜秋木蟲 (正式寫手)
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[求助]
Tricine膠應該怎么跑？ 已有4人參與
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最經(jīng)在做小分子蛋白，試過了17%和Tricine膠，Tricine膠的效果更好，樓主果斷決定做Tricine膠，用的是Nature protein上面的配方，用的是兩層膠，沒有加尿素。電壓選用的是30V跑40-50min后改用130V跑至底部，放在4℃環(huán)境中電泳時間約為3h，用的是bio-rad的mini型的電泳槽。然后固定染色脫色，出現(xiàn)以下問題： 1.買的是低分子多肽作為Marker，有5個條帶，最下面的兩個條帶有點拖尾且不清晰，有點彌散的現(xiàn)象，感覺上是沒有怎么分開，最重要的，分子量根本對不上。 2.Marker總是會拖著臨近的樣品條帶，臨近Marker的條帶總是跑的很丑很丑。 3.8.8KDa以下的樣品條帶不清楚，當然這個有可能是樣品的問題，但是小分子確實沒有被分開的感覺，不清楚。 樓主下一步的想法是確認Marker應該怎么跑的問題，接著再確認超小分子跑不開的問題，請牛人幫忙解決一下，需要在膠里面加尿素嗎？跑膠的電壓是不是太高了呢?bio-rad電泳槽是不是只能跑普通膠不能做小分子膠呢？ |
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