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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » PCR相關 » race相關問題
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dingcong1216新蟲 (小有名氣)
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[求助]
race相關問題 已有2人參與
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| 最近要做race，但是有好多都不太懂，想請教一下各位大俠。我們用的SMART RACE cDNA Amplification kit的方法，但是里面的東西都是師姐之前合成的，其中有10*UPM Long ,10*UPM short ,這個是要兩個混合后濃度為long 0.4uM, short 2uM嗎？如果要做巢式PCR的話是要先用外側(cè)引物與UPM進行PCR,將產(chǎn)物稀釋50倍后再用內(nèi)側(cè)引物與NUP（Nested Universal Primer A)進行PCR嗎？還有3race與 5race的UPM是一樣的嗎？還有我們之前的反轉(zhuǎn)錄是將普通反轉(zhuǎn)錄試劑盒takara的RR037A中的oligo dT Primer 與Random 6 mers換成3 race adaptor 后，其余方法與普通反轉(zhuǎn)錄一樣，做3race的話是按照試劑盒說明書合成cDNA還是和我們之前一樣呢？如果有大俠懂的話，希望多多指點。 |
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2樓2014-08-10 11:51:39
3樓2014-08-11 21:44:36
Neo2000
木蟲 (著名寫手)
- 應助: 639 (博士)
- 金幣: 8720.2
- 紅花: 37
- 帖子: 1700
- 在線: 269.3小時
- 蟲號: 322365
- 注冊: 2007-03-11
- 專業(yè): 生物物理、生物化學與分子
4樓2014-08-12 07:54:54
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