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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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[求助] 請教DNA電泳的濃度及電壓時(shí)間設(shè)置已有5人參與

大家好，我PCR產(chǎn)物預(yù)計(jì)大小在90—200左右，請問我用瓊脂糖電泳時(shí)膠的濃度選擇多少？同時(shí)電泳時(shí)的電壓以及時(shí)間？謝謝！

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【求助/交流】DNA電泳圖求助�。ㄓ袌D）已經(jīng)有21人回復(fù)
【求助/交流】請教一個(gè)DNA電泳的問題已經(jīng)有14人回復(fù)

1樓 2014-08-13 08:58:53

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ssssllllnnnn

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用2%～2.5%便可。
電壓90V就可以了，不要太高。
時(shí)間半小時(shí)內(nèi)（20～30min應(yīng)該就可以了，可以經(jīng)常看看）

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2樓2014-08-13 09:14:59

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盛夏海棠

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PCR產(chǎn)物片段越小跑的越快，需要用濃度高些的膠，2%就可以，電壓高的話跑的也快，一般loading buffer會(huì)有指示作用，一般跑到膠的一半時(shí)就可以看結(jié)果了

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3樓2014-08-13 09:18:01

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hbsdz

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5樓: Originally posted by Insecta_A at 2014-08-22 10:30:01
請問，我一般用微波爐中火打2分鐘左右，我感覺微波爐在加熱的時(shí)候會(huì)蒸發(fā)，如果做2%的膠（0.7g+35ml 1X TAE）是不是真實(shí)的膠濃度就會(huì)高一些，所以我想請問你平時(shí)在做的時(shí)候，大概會(huì)多加多少ml的緩沖液來彌補(bǔ)蒸發(fā)的損 ...

我也是用的2分鐘微波爐加熱，我一般多加2-4mL的1X TAE溶液。110V 20----25分鐘左右。希望可以幫到你。

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11樓2014-09-10 11:10:02

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ncuduhan

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瓊脂糖濃度/％ 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0
線狀DNA大小/kb 60－5 20－1 10－0.8 7－0.5 6－0.4 4－0.2 3－0.1

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4樓2014-08-13 12:13:45

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2樓: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-13 09:14:59
用2%～2.5%便可。
電壓90V就可以了，不要太高。
時(shí)間半小時(shí)內(nèi)（20～30min應(yīng)該就可以了，可以經(jīng)�？纯矗�

請問，我一般用微波爐中火打2分鐘左右，我感覺微波爐在加熱的時(shí)候會(huì)蒸發(fā)，如果做2%的膠（0.7g+35ml 1X TAE）是不是真實(shí)的膠濃度就會(huì)高一些，所以我想請問你平時(shí)在做的時(shí)候，大概會(huì)多加多少ml的緩沖液來彌補(bǔ)蒸發(fā)的損失？

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5樓2014-08-22 10:30:01

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5樓: Originally posted by Insecta_A at 2014-08-21 14:30:01
請問，我一般用微波爐中火打2分鐘左右，我感覺微波爐在加熱的時(shí)候會(huì)蒸發(fā)，如果做2%的膠（0.7g+35ml 1X TAE）是不是真實(shí)的膠濃度就會(huì)高一些，所以我想請問你平時(shí)在做的時(shí)候，大概會(huì)多加多少ml的緩沖液來彌補(bǔ)蒸發(fā)的損 ...

兩分鐘是不是太長了？微波爐的功率多大？
一般不需要這么長時(shí)間。只要看到開了就停下來，搖動(dòng)一會(huì)。過幾分鐘基本就可以了。如果仍然沒有完全溶解，則可以繼續(xù)加熱一會(huì)，仍然不需要長時(shí)間處于沸騰狀態(tài)。

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6樓2014-08-22 10:36:05

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Hliotrope

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Insecta_A: 金幣+1, ★有幫助 2014-08-22 15:53:48

2%膠，140V以內(nèi)就行，電壓高跑的快一些，Loading Buffer電泳速度與300bp大小DNA速度一樣，所以別讓loading buffer跑太前，跑到膠一半處就差不多了。。。

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Someone

7樓2014-08-22 11:05:31

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6樓: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-22 10:36:05
兩分鐘是不是太長了？微波爐的功率多大？
一般不需要這么長時(shí)間。只要看到開了就停下來，搖動(dòng)一會(huì)。過幾分鐘基本就可以了。如果仍然沒有完全溶解，則可以繼續(xù)加熱一會(huì)，仍然不需要長時(shí)間處于沸騰狀態(tài)。...

用的中火，你們一般是怎樣做的呢

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8樓2014-08-22 15:53:20

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Insecta_A(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-09-10 18:14:18

我們常用 1%瓊脂糖凝膠，電壓130∨電壓。具體取決于核酸片段大小，浮動(dòng)應(yīng)該不大～

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9樓2014-08-22 16:15:15

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★
Insecta_A(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-09-10 18:14:30

超純水加入瓊脂糖之后，微波爐中高火五分鐘左右，看到底部沸騰氣泡即可～

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10樓2014-08-22 16:17:05

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