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PCR退火溫度為什么要設(shè)置程序升溫？ 已有3人參與
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| 最近做PCR，文獻(xiàn)中的PCR條件中退火溫度是50~60°C，1min，很不明白這個(gè)溫度條件是什么意思，在PCR儀上要怎么設(shè)定？ |
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 核酸生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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3樓2014-08-18 22:38:23
ksws0465326
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
淡水三年: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-08-19 19:34:46
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淡水三年: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-08-19 19:34:46
| 是退火溫度梯度實(shí)驗(yàn)吧，同一個(gè)體系下，不同的退火溫度，可能會(huì)有不同的結(jié)果條帶，看在哪個(gè)溫度下擴(kuò)增的最好，條帶清晰單一，在合成一個(gè)新的質(zhì)�；蚧蚪M插入片段之類(lèi)的，有時(shí)會(huì)應(yīng)用到退火溫度梯度實(shí)驗(yàn)，和引物濃度梯度，模板濃度梯度等等，根據(jù)實(shí)際情況而定。至于怎么設(shè)定，有可以做這個(gè)的PCR儀，設(shè)置一個(gè)最低退火溫度，和一個(gè)最高的退火溫度，每一個(gè)豎排都是一個(gè)溫度，把樣品放入你想用的溫度里就行，如果沒(méi)有這種PCR儀，只能多用幾臺(tái)PCR儀了，每臺(tái)設(shè)定不同的退火溫度進(jìn)行試驗(yàn)。希望對(duì)你有所幫助。 |
2樓2014-08-18 20:17:05
4樓2014-08-19 07:57:11
jpfwx
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5樓2014-08-19 08:57:44
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