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[求助]
PCR退火溫度為什么要設置程序升溫? 已有3人參與
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| 最近做PCR,文獻中的PCR條件中退火溫度是50~60°C,1min,很不明白這個溫度條件是什么意思,在PCR儀上要怎么設定? |
核酸生物學實驗經驗 |
金蟲 (小有名氣)
| 是退火溫度梯度實驗吧,同一個體系下,不同的退火溫度,可能會有不同的結果條帶,看在哪個溫度下擴增的最好,條帶清晰單一,在合成一個新的質;蚧蚪M插入片段之類的,有時會應用到退火溫度梯度實驗,和引物濃度梯度,模板濃度梯度等等,根據實際情況而定。至于怎么設定,有可以做這個的PCR儀,設置一個最低退火溫度,和一個最高的退火溫度,每一個豎排都是一個溫度,把樣品放入你想用的溫度里就行,如果沒有這種PCR儀,只能多用幾臺PCR儀了,每臺設定不同的退火溫度進行試驗。希望對你有所幫助。 |


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