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angelagirls金蟲 (正式寫手)
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SDS-PAGE 遇到問題 已有3人參與
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跑了好多天的電泳 讓人要瘋了的趕腳 我的marker是1.2-4.5的 分離膠15% 濃縮膠3% 蛋白濃度1mg/mL 跑電泳時 溴酚藍顏色特別淺 基本上很難看到 mark只能跑出來三條 最后脫色完 樣品基本上木有條帶 雁過無痕啊 甚是傷心 求指教 ![]() |

木蟲 (正式寫手)
金蟲 (正式寫手)
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金蟲 (正式寫手)
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一: Tricine-SDS-PAGE是一種適用分離鑒定小分子量蛋白的電泳方案。常見有兩種:一是由16%分離膠,10%間隙膠,4%濃縮膠;二是16%分離膠,4%濃縮膠。 二:溶液配制 陽極緩沖液:0.2M Tris-HCl. pH8.9(準(zhǔn)確調(diào)) 陰極緩沖液:0.1M Tris-HCl,0.1M Tricine, 0.1%(m/v)SDS,pH8.25(不需要調(diào)很多) 凝膠緩沖液:3M Tris-HCl, 0.3%(m/v)SDS,pH8.45(pH需要準(zhǔn)確調(diào)) 30%丙烯酰胺:29.0g丙烯酰胺,1.0g甲叉雙丙烯酰胺,定容到100ml。 三:配膠配方 16%分離膠 10%間隙膠 4%濃縮膠 凝膠緩沖液 2.0ml 1.34ml 0.75ml 30%丙烯酰胺 4.26ml 1.67ml 0.42ml 尿素 2.16g — — 水 1.5ml 2ml 1.9ml 10%APS 100 μl 30 μl 50 μl TEMED 10 μl 3 μl 5 μl 膠層高度比例:3cm—2cm—2cm 四:配置事項: A: 分離膠和間隙膠同時加入膠板:分離膠加入3厘米,然后加入間隙膠2厘米 。最后加入20%乙醇液封; B: 膠凝后,加入濃縮膠; C: 樣品的處理:對樣品的pH要求比較嚴(yán)格,確保樣品的PH在8.45左右; D: 樣品的上樣量不能過大; E:電泳槽內(nèi)槽為陰極,外液陽極。注意不要漏液,是內(nèi)外液相通。 |
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一: Tricine-SDS-PAGE是一種適用分離鑒定小分子量蛋白的電泳方案。常見有兩種:一是由16%分離膠,10%間隙膠,4%濃縮膠;二是16%分離膠,4%濃縮膠。 二:溶液配制 陽極緩沖液:0.2M Tris-HCl. pH8.9(準(zhǔn)確調(diào)) 陰極緩沖液:0.1M Tris-HCl,0.1M Tricine, 0.1%(m/v)SDS,pH8.25(不需要調(diào)很多) 凝膠緩沖液:3M Tris-HCl, 0.3%(m/v)SDS,pH8.45(pH需要準(zhǔn)確調(diào)) 30%丙烯酰胺:29.0g丙烯酰胺,1.0g甲叉雙丙烯酰胺,定容到100ml。 三:配膠配方 16%分離膠 10%間隙膠 4%濃縮膠 凝膠緩沖液 2.0ml 1.34ml 0.75ml 30%丙烯酰胺 4.26ml 1.67ml 0.42ml 尿素 2.16g — — 水 1.5ml 2ml 1.9ml 10%APS 100 μl 30 μl 50 μl TEMED 10 μl 3 μl 5 μl 膠層高度比例:3cm—2cm—2cm 四:配置事項: A: 分離膠和間隙膠同時加入膠板:分離膠加入3厘米,然后加入間隙膠2厘米 。最后加入20%乙醇液封; B: 膠凝后,加入濃縮膠; C: 樣品的處理:對樣品的pH要求比較嚴(yán)格,確保樣品的PH在8.45左右; D: 樣品的上樣量不能過大; E:電泳槽內(nèi)槽為陰極,外液陽極。注意不要漏液,是內(nèi)外液相通。 |
至尊木蟲 (文壇精英)
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