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angelagirls金蟲(chóng) (正式寫手)
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[求助]
SDS-PAGE 遇到問(wèn)題 已有3人參與
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跑了好多天的電泳 讓人要瘋了的趕腳 我的marker是1.2-4.5的 分離膠15% 濃縮膠3% 蛋白濃度1mg/mL 跑電泳時(shí) 溴酚藍(lán)顏色特別淺 基本上很難看到 mark只能跑出來(lái)三條 最后脫色完 樣品基本上木有條帶 雁過(guò)無(wú)痕啊 甚是傷心 求指教  |
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一： Tricine-SDS-PAGE是一種適用分離鑒定小分子量蛋白的電泳方案。常見(jiàn)有兩種：一是由16%分離膠，10%間隙膠，4%濃縮膠；二是16%分離膠，4%濃縮膠。 二：溶液配制 陽(yáng)極緩沖液：0.2M Tris-HCl. pH8.9(準(zhǔn)確調(diào)) 陰極緩沖液：0.1M Tris-HCl，0.1M Tricine, 0.1%（m/v）SDS，pH8.25（不需要調(diào)很多） 凝膠緩沖液：3M Tris-HCl, 0.3%(m/v)SDS,pH8.45（pH需要準(zhǔn)確調(diào)） 30%丙烯酰胺：29.0g丙烯酰胺，1.0g甲叉雙丙烯酰胺，定容到100ml。 三：配膠配方 16%分離膠 10%間隙膠 4%濃縮膠 凝膠緩沖液 2.0ml 1.34ml 0.75ml 30%丙烯酰胺 4.26ml 1.67ml 0.42ml 尿素 2.16g — — 水 1.5ml 2ml 1.9ml 10%APS 100 μl 30 μl 50 μl TEMED 10 μl 3 μl 5 μl 膠層高度比例：3cm—2cm—2cm 四：配置事項(xiàng)： A: 分離膠和間隙膠同時(shí)加入膠板：分離膠加入3厘米，然后加入間隙膠2厘米 。最后加入20%乙醇液封； B: 膠凝后，加入濃縮膠； C: 樣品的處理：對(duì)樣品的pH要求比較嚴(yán)格，確保樣品的PH在8.45左右； D: 樣品的上樣量不能過(guò)大； E：電泳槽內(nèi)槽為陰極，外液陽(yáng)極。注意不要漏液，是內(nèi)外液相通。 |
8樓2014-09-17 09:36:22
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
angelagirls: 金幣+3, ★★★很有幫助 2014-09-19 09:02:12
angelagirls: 金幣+3, ★★★很有幫助 2014-09-19 09:02:12
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一： Tricine-SDS-PAGE是一種適用分離鑒定小分子量蛋白的電泳方案。常見(jiàn)有兩種：一是由16%分離膠，10%間隙膠，4%濃縮膠；二是16%分離膠，4%濃縮膠。 二：溶液配制 陽(yáng)極緩沖液：0.2M Tris-HCl. pH8.9(準(zhǔn)確調(diào)) 陰極緩沖液：0.1M Tris-HCl，0.1M Tricine, 0.1%（m/v）SDS，pH8.25（不需要調(diào)很多） 凝膠緩沖液：3M Tris-HCl, 0.3%(m/v)SDS,pH8.45（pH需要準(zhǔn)確調(diào)） 30%丙烯酰胺：29.0g丙烯酰胺，1.0g甲叉雙丙烯酰胺，定容到100ml。 三：配膠配方 16%分離膠 10%間隙膠 4%濃縮膠 凝膠緩沖液 2.0ml 1.34ml 0.75ml 30%丙烯酰胺 4.26ml 1.67ml 0.42ml 尿素 2.16g — — 水 1.5ml 2ml 1.9ml 10%APS 100 μl 30 μl 50 μl TEMED 10 μl 3 μl 5 μl 膠層高度比例：3cm—2cm—2cm 四：配置事項(xiàng)： A: 分離膠和間隙膠同時(shí)加入膠板：分離膠加入3厘米，然后加入間隙膠2厘米 。最后加入20%乙醇液封； B: 膠凝后，加入濃縮膠； C: 樣品的處理：對(duì)樣品的pH要求比較嚴(yán)格，確保樣品的PH在8.45左右； D: 樣品的上樣量不能過(guò)大； E：電泳槽內(nèi)槽為陰極，外液陽(yáng)極。注意不要漏液，是內(nèi)外液相通。 |
9樓2014-09-17 09:38:00
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