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Bioexperixgs新蟲 (正式寫手)
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[求助]
酵母基因組提取問題
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各位大神，本人核酸提取新手一枚，依據(jù)分子克隆上酵母基因組微量提取的方法并稍加改進(jìn)抽提念珠菌基因組，現(xiàn)抽提的基因組無RNA污染，無降解，就是有點(diǎn)不知道是蛋白質(zhì)還是多糖之類的雜質(zhì)，求大神指點(diǎn)，去除雜質(zhì)的方法，抽提步驟如下 （1） 取1ml過夜培養(yǎng)菌液，離心收集菌體，菌體用1mL PBS洗滌2次，最大轉(zhuǎn)速離心1min收集菌體； （2） 加入500μL山梨醇緩沖液重懸菌體，混勻后加入50U Lyticase，37℃分別水浴4h； （3） 12000rpm離心1min，收集沉淀； （4） 沉淀中加入500μL酵母緩沖液重懸混勻，加入50μL 10%SDS，迅速混勻后置于65℃水浴30min； （5） 加入200μL 5M KAc（pH8.9），混勻后冰浴1h； （6） 12000rpm,4℃離心5min，轉(zhuǎn)移上清于新的EP管中； （7） 加入等體積的異丙醇，12000rpm離心10s； （8） 棄上清，沉淀自然干燥10min； （9） 沉淀加入300μL TE（含RNase）緩沖液溶解，37℃水浴消化RNA 1h； （10）加入等體積酚：氯仿：異戊醇(25:24:1)，充分混勻后12000rpm離心5min； （11）取上層水相于新的EP管中，加入1/10體積的3M NaAc，等體積的異丙醇，混勻后12000rpm離心1min； （12）加入500μL 75%乙醇洗滌DNA，12000rpm離心1min； （13）棄上清，沉淀于室溫自然干燥；然后加入50μL TE緩沖液溶解； （14）取出5μL用于1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，剩余溶液于-20℃中保存?zhèn)溆谩?br /> IMG_2000.JPG |
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小馬奔騰0217
銅蟲 (初入文壇)
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2樓2015-06-15 11:49:25
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5樓2016-03-07 16:03:24
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[考研]
 一志愿 西北大學(xué) 總分282 英語(yǔ)一62 求調(diào)劑
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18419759900 2026-03-25 | 8/400 |
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[考研] 一志愿北化085600材料專碩275|有文章專利｜求調(diào)劑 +3 | Micky11223 2026-03-25 | 3/150 |
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[考研] 334求調(diào)劑 +3 | 雨清天晴 2026-03-21 | 3/150 |
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[考研] 289求調(diào)劑 +17 | 碩星赴 2026-03-23 | 17/850 |
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[考研] 材料277求調(diào)劑 +5 | min3 2026-03-24 | 5/250 |
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[考研] 一志愿南航 335分 | 0856材料化工 | GPA 4.07 | 有科研經(jīng)歷 +6 | cccchenso 2026-03-23 | 6/300 |
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