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[求助]
走過路過的大俠幫忙啊-----重組質粒轉化后抽提質粒濃度低 已有3人參與
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| 請問各位大俠，我將目的片段和載體，雙酶切（快切）20min，跑膠檢驗沒問題后連接轉化，然后挑取一些菌株活化抽提質粒，檢測出來質粒濃度20-30ng/ul,不知道是為什么，請各位走過路過的大俠指點迷津�。。。。。�！ |
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7樓2014-09-18 09:52:07
youlinglyw
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2樓2014-09-16 21:09:23
【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數 +1
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你這個問題可以從兩方面來考慮： 首先，不知道樓主有沒有檢測抽提出來的質粒是否為所需的質粒（可以PCR鑒定和酶切鑒定），如果是，那么說明之前的酶切、連接、轉化是沒有問題的，那么問題就出來抽提質粒上，可能的原因有兩個，一是菌的問題，即濃度太低或者或者質粒兼容性不好，前者解決辦法就是加長搖菌時間，后者解決辦法就是換感受態(tài)菌株，重新轉化； 第二，如果檢測結果表明所抽提核酸（可能是混進的菌株基因組DNA或者RNA）不是所需質粒，那么問題就在酶切、連接、轉化上了，建議逐一排查各步可能出現的問題，方法就是加進陰性對照和陽性對照。 個人見解，僅供參考 |
3樓2014-09-16 22:12:46
4樓2014-09-17 08:56:50
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