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寒心季新蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于T4和solution I 的連接問題 已有3人參與
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酶切液用T4的連接效果不是很好，后來有人告知可以用T載體中的solution I 連接。 原體系是這樣的： 酶切液 10ul R-Adaptor 2ul 10XLigase buffer 2 ul T4 DNA Ligase 2ul 水 4ul 總共是20ul。 現(xiàn)在換成solution I 連接，請(qǐng)問體系該怎么樣變？就 酶切液、R-Adaptor 、水、solution I 四樣構(gòu)成一個(gè)新體系，還需要其他嗎？ |
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寒心季
新蟲 (初入文壇)
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5樓2014-09-18 10:14:29
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2樓2014-09-18 00:20:29
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-09-18 18:29:49
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| 酶切后要膠回收，不能直接用酶切液體做連接！T連接很容易，你上面的體系的有問題，一般連接前最好計(jì)算下載體與片斷的摩爾比，一般1：3-1：10之間都非常好連接！solution I 里面包括Ligase buffer 和 T4 DNA Ligase ，用量是2倍的！10UL體系就用5UL的 solution I ！個(gè)人認(rèn)為樓主不是酶的問題，主要還是樓主體系沒有計(jì)算和酶切產(chǎn)物沒有膠回收！ |
3樓2014-09-18 08:37:19
4樓2014-09-18 08:44:18
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