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[交流]
蛋白質(zhì)濃度測(cè)定及活性檢測(cè) 已有3人參與
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| 我純化出來的蛋白質(zhì)做兩次BC A 蛋白定量，一次稀釋5倍，一次稀釋10倍，結(jié)果分別是4.17mg/ml，1.4mg/ml，擬合系數(shù)均在0.99以上，為什么差距會(huì)這么大呢。這下面要檢測(cè)蛋白活性，不知道按照哪個(gè)算，我用了cck-8法檢測(cè)細(xì)胞活性，說明書上寫著，要100ul 5000個(gè)細(xì)胞，我想了解下這個(gè)怎么估計(jì)呢，難道在鋪96孔板之前要把細(xì)胞懸浮，計(jì)數(shù)，然后再鋪板嗎？還有蛋白質(zhì)稀釋好后能直接放在細(xì)胞房超凈臺(tái)里，還是放在冰上，要不要對(duì)蛋白進(jìn)行滅菌處理等，謝謝 |
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璧月
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4樓2014-09-25 19:10:31
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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我也遇到bca稀釋后濃度不準(zhǔn)的情況。不過我最終是按照凍干品重量濃度算的。 我是做mtt，需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行懸浮計(jì)數(shù)，稀釋到自己要的濃度。 要做到蛋白無菌，就是0.22μm過濾，加藥時(shí)在超凈臺(tái)內(nèi)操作。我因?yàn)榱亢苌伲^濾會(huì)有損失，有時(shí)會(huì)把凍干品拿到超凈臺(tái)，拿滅過菌的無菌水溶解，再加藥，這樣不能保證完全無菌，不過比在外面溶了直接用來加藥要強(qiáng)。 你們實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該有人做過的，多問問唄。 [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
2樓2014-09-24 21:50:06
3樓2014-09-25 11:27:53
5樓2014-09-25 20:58:11
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