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shisishese銀蟲 (小有名氣)
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G418篩選轉(zhuǎn)染問題 已有1人參與
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請問一下，最近剛接觸轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，好多地方不太懂。 G418篩選可以用來穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，那它可以用來做瞬時(shí)轉(zhuǎn)染嗎？選用G418的目的是？我想把質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，然后接種96孔板進(jìn)行藥物刺激篩選，那么轉(zhuǎn)染是轉(zhuǎn)在培養(yǎng)瓶中，6孔板還是24孔板（據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道）比較好？G418是加在轉(zhuǎn)染后的培養(yǎng)瓶（板）中，還是加在96孔板中？請大神賜教！感激不盡 |
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shisishese
銀蟲 (小有名氣)
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3樓2014-12-04 21:00:00
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shisishese: 金幣+10, ★有幫助, 2 2014-11-03 18:56:21
shisishese: 金幣+10, ★有幫助, 2 2014-11-03 18:56:21
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一般我們轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒上會帶有抗生素的基因，當(dāng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞，那么抗性基因就會表達(dá)，那么就獲得了對抗生素的抵抗能力，G418就是其中常用的一種抗生素。那些沒有轉(zhuǎn)染進(jìn)質(zhì)粒的細(xì)胞就被G418殺死了（事先要摸清楚G418對于你的細(xì)胞的致死濃度） 由于轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒大部分在細(xì)胞質(zhì)中，隨著傳代會失去，那么就失去了對抗生素的抵抗。然而總會有個(gè)別質(zhì)�？赡苓M(jìn)入細(xì)胞核，然后與染色體同源重組，然后你連續(xù)使用G418篩選，這時(shí)候細(xì)胞就可以永久性獲得抗生素的抗性能力，這個(gè)時(shí)候的細(xì)胞就是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞了 一般情況下，瞬轉(zhuǎn)的細(xì)胞不做G418篩選。至于轉(zhuǎn)多大的孔板，我個(gè)人覺得完全是按照你種細(xì)胞數(shù)決定，你要有足夠與種96孔板的細(xì)胞。 |
2樓2014-11-03 16:02:35
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