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[求助]
乳酸乳球菌代謝產物的分離純化求助 已有3人參與
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各位大俠,實驗室自己分離了一株乳酸乳球菌,能產生抗菌物質,排除了乳酸和過氧化氫抑菌的可能,根據(jù)文獻說,這類菌會產生種細菌素或類細菌素的抗菌物質,可能是蛋白結構,所以做了蛋白酶的酶解實驗,發(fā)現(xiàn)只能是減少40%的抑菌性。調節(jié)PH,做PH梯度實驗,發(fā)現(xiàn)從2到10,在ph=3.5的時候抑菌最大,在7以后就幾乎沒有抑菌率了。但是,老板比較執(zhí)著。。。。。就推測是蛋白性質的物質,讓我分離。我使用了硫酸銨沉淀,從20%到90%,發(fā)現(xiàn)沒有沉淀下來。 做了乙酸乙酯,氯仿甲醇的有機溶劑萃取,沒有萃取出來。 為了減少培養(yǎng)基的雜蛋白的干擾,減少分離的難度,我使用了優(yōu)化后的培養(yǎng)基,用無機氮源代替了有機氮源,后來我做了乙醇的沉淀實驗,因為無機氮源用的是硫酸銨,加的乙醇的終濃度是80%,有一種乙醇硫酸銨雙水相萃取的感覺,白花花的全是沉淀,但是沒有抑菌性,而上清液的抑菌性比原來沒有用乙醇沉淀的要高。然后聽一大神的建議使用D101大孔樹脂進行分離,現(xiàn)在想求助一下各位大神們: 一 在大孔樹脂的分離過程中,含有目標物質的溶液的PH,會不會影響大孔樹脂的吸附?因為我看文獻上有的調節(jié)了,有的沒有調節(jié),有師兄說如果調節(jié)pH可能會才純化的過程中人為的產生新的物質干擾后續(xù)的分離。 二 我使用大孔樹脂進行吸附的時候,目前的情況,我因為樹脂的類型沒有確定,只是在做靜態(tài)吸附試驗,而且我的目的就是分離出來就可以了,我在做靜態(tài)吸附試驗的時候,樹脂的單位最大承載量(就是那種過載不過載)我要不要測?因為我發(fā)現(xiàn)我樹脂加的少了,在PH=7的時候是可以吸附上去的,但是加多了就不行了。 三 就是還能不能給點分離的經驗或者關于還有別的什么其他的材料可以分離這東西的啊,本人以前學食品的,這東西是門外漢,謝謝各位啦。 |
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你用大孔做蛋白,不太清楚可行不,我建議你可以把發(fā)酵產物先用不同溶劑萃取一下,萃取成幾個部位,比如 水部位,正丁醇部位,乙酸乙酯部位,氯仿部位,石油醚部位,之后在測定活性,如果發(fā)現(xiàn)真如你們導師所說蛋白產生的活性的話,那么在這些部位里,水部位活性應該最好,。如果你做過這些部分后發(fā)現(xiàn)哪個部分活性好,那你就做哪個部位的,這就算是活性跟蹤分離的一種了。 [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
金蟲 (小有名氣)
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