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reaper2011新蟲 (初入文壇)
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[求助]
乳酸乳球菌代謝產(chǎn)物的分離純化求助 已有3人參與
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各位大俠，實(shí)驗(yàn)室自己分離了一株乳酸乳球菌，能產(chǎn)生抗菌物質(zhì)，排除了乳酸和過氧化氫抑菌的可能，根據(jù)文獻(xiàn)說，這類菌會(huì)產(chǎn)生種細(xì)菌素或類細(xì)菌素的抗菌物質(zhì)，可能是蛋白結(jié)構(gòu)，所以做了蛋白酶的酶解實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)只能是減少40%的抑菌性。調(diào)節(jié)PH，做PH梯度實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)從2到10，在ph=3.5的時(shí)候抑菌最大，在7以后就幾乎沒有抑菌率了。但是，老板比較執(zhí)著。。。。。就推測(cè)是蛋白性質(zhì)的物質(zhì)，讓我分離。我使用了硫酸銨沉淀，從20%到90%，發(fā)現(xiàn)沒有沉淀下來。 做了乙酸乙酯，氯仿甲醇的有機(jī)溶劑萃取，沒有萃取出來。 為了減少培養(yǎng)基的雜蛋白的干擾，減少分離的難度，我使用了優(yōu)化后的培養(yǎng)基，用無機(jī)氮源代替了有機(jī)氮源，后來我做了乙醇的沉淀實(shí)驗(yàn)，因?yàn)闊o機(jī)氮源用的是硫酸銨，加的乙醇的終濃度是80%，有一種乙醇硫酸銨雙水相萃取的感覺，白花花的全是沉淀，但是沒有抑菌性，而上清液的抑菌性比原來沒有用乙醇沉淀的要高。然后聽一大神的建議使用D101大孔樹脂進(jìn)行分離，現(xiàn)在想求助一下各位大神們： 一 在大孔樹脂的分離過程中，含有目標(biāo)物質(zhì)的溶液的PH，會(huì)不會(huì)影響大孔樹脂的吸附？因?yàn)槲铱次墨I(xiàn)上有的調(diào)節(jié)了，有的沒有調(diào)節(jié)，有師兄說如果調(diào)節(jié)pH可能會(huì)才純化的過程中人為的產(chǎn)生新的物質(zhì)干擾后續(xù)的分離。 二 我使用大孔樹脂進(jìn)行吸附的時(shí)候，目前的情況，我因?yàn)闃渲念愋蜎]有確定，只是在做靜態(tài)吸附試驗(yàn)，而且我的目的就是分離出來就可以了，我在做靜態(tài)吸附試驗(yàn)的時(shí)候，樹脂的單位最大承載量（就是那種過載不過載）我要不要測(cè)��？因?yàn)槲野l(fā)現(xiàn)我樹脂加的少了，在PH=7的時(shí)候是可以吸附上去的，但是加多了就不行了。 三 就是還能不能給點(diǎn)分離的經(jīng)驗(yàn)或者關(guān)于還有別的什么其他的材料可以分離這東西的啊，本人以前學(xué)食品的，這東西是門外漢，謝謝各位啦。 |
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9樓2014-10-15 20:43:47
【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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你用大孔做蛋白，不太清楚可行不，我建議你可以把發(fā)酵產(chǎn)物先用不同溶劑萃取一下，萃取成幾個(gè)部位，比如 水部位，正丁醇部位，乙酸乙酯部位，氯仿部位，石油醚部位，之后在測(cè)定活性，如果發(fā)現(xiàn)真如你們導(dǎo)師所說蛋白產(chǎn)生的活性的話，那么在這些部位里，水部位活性應(yīng)該最好，。如果你做過這些部分后發(fā)現(xiàn)哪個(gè)部分活性好，那你就做哪個(gè)部位的，這就算是活性跟蹤分離的一種了。 [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
2樓2014-10-15 00:37:58
reaper2011
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恩，謝謝您了。我之前做了從發(fā)酵液中的有機(jī)溶劑的萃取。做了乙酸乙酯的，氯仿甲醇的，沒有做石油醚和正丁醇的，發(fā)現(xiàn)活性都是在水部位的，有機(jī)相是沒有抑菌活性的。然后我老師判斷這個(gè)物質(zhì)的極性比較大，我想請(qǐng)問一下大俠，這樣判斷的準(zhǔn)確嗎？還有就是您的建議“如果發(fā)現(xiàn)真如你們導(dǎo)師所說蛋白產(chǎn)生的活性的話，那么在這些部位里，水部位活性應(yīng)該最好”這就是說如果是蛋白，我用有機(jī)溶劑萃取是萃取不出來的，是嘛？但是我硫酸銨沉淀也沒有沉淀出來，誒。。。。。非常感謝您了。 |
3樓2014-10-15 07:42:24
0ceaney
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4樓2014-10-15 08:46:10
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