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新蟲(chóng) (初入文壇)

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[交流] 菌落PCR明顯有目標(biāo)條帶，酶切驗(yàn)證卻不對(duì)，測(cè)序也沒(méi)結(jié)果已有6人參與

質(zhì)粒雙酶切，割膠回收，感覺(jué)還是有雜帶，沒(méi)有進(jìn)I啊哦帶一步純化直接酶連，大腸長(zhǎng)出來(lái)之后做菌落PCR，有一株菌有明顯條帶，但是提取質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切驗(yàn)證卻沒(méi)有切成功，用引物對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行PCR，有兩條非常明顯的條帶，這是為什么？

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1樓 2014-10-17 18:50:58

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cnzpli

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我的pcr酶切都對(duì)就是測(cè)序不對(duì)

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3樓2014-10-18 09:08:27

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bio_sci

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菌落pcr經(jīng)常有非特異性帶

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2樓2014-10-17 22:16:23

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593318518

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我覺(jué)得就是你的酶切位點(diǎn)突變了。測(cè)序就知道了

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4樓2014-10-18 10:36:05

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yudaoqian88

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kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2014-10-22 12:26:46

PCR存在假陽(yáng)性，應(yīng)該以酶切結(jié)果為準(zhǔn)！有時(shí)候個(gè)別克隆酶切位點(diǎn)會(huì)有突變，這也是不能用的！質(zhì)粒作為模板P的效果相對(duì)特異些，但不敢保證完全正確，有時(shí)候引物非特異擴(kuò)增會(huì)顯示載體序列！建議再挑克隆，pcr檢測(cè)后再酶切檢測(cè)！

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特別喜歡家門(mén)口開(kāi)門(mén)的瞬間，寶寶那個(gè)高興呀，蹦蹦跳跳，好不熱鬧！

5樓2014-10-18 12:51:16

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