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[求助] 連接轉(zhuǎn)化后提質(zhì)粒做酶切，可以切出帶，做質(zhì)粒PCR卻P不出來，為什么？？？已有10人參與

質(zhì)粒是PCM351，連接轉(zhuǎn)化后挑菌落提質(zhì)粒，然后做酶切跑膠，可以很明顯的看到切下的條帶，大小也正確，但用質(zhì)粒做PCR后卻跑不出條帶，，這是什么原因啊，快瘋了。

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1樓 2014-10-20 15:28:18

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引用回帖:

2樓: Originally posted by 小冀- at 2014-10-20 15:51:42
我也遇到過相同的情況，可以切出來，但是PCR的時候沒有條帶···我之所以做PCR，是因為我酶切之后的片段比預(yù)想的片段少大概1000bp，所以想用PCR鑒定一下，但沒有P出來···個人認(rèn)為酶切比PCR靠譜···

我是轉(zhuǎn)化后挑了16個菌落做菌落PCR，但是P不出來或者非常非常模糊，所以我直接提質(zhì)粒酶切了，奇怪的是酶切的16個樣本都切出來了，就是說我的連接效率是100%，所以這個概率太高了，才做的質(zhì)粒PCR，結(jié)果一個沒有P出來。一般來說質(zhì)粒PCR有結(jié)果，酶切沒結(jié)果是可疑的；但我的酶切有結(jié)果，質(zhì)粒ＰＣＲ卻沒結(jié)果，這個是為什么呢，我想不通呀，，，壓力好大

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3樓2014-10-20 15:58:08

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小冀-

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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
我就是保哥哥: 金幣+2, ★有幫助 2014-10-20 15:53:04

我也遇到過相同的情況，可以切出來，但是PCR的時候沒有條帶···我之所以做PCR，是因為我酶切之后的片段比預(yù)想的片段少大概1000bp，所以想用PCR鑒定一下，但沒有P出來···個人認(rèn)為酶切比PCR靠譜···

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2樓2014-10-20 15:51:42

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謝錚

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4樓2014-10-20 16:33:50

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引用回帖:

3樓: Originally posted by 我就是保哥哥 at 2014-10-20 15:58:08
我是轉(zhuǎn)化后挑了16個菌落做菌落PCR，但是P不出來或者非常非常模糊，所以我直接提質(zhì)粒酶切了，奇怪的是酶切的16個樣本都切出來了，就是說我的連接效率是100%，所以這個概率太高了，才做的質(zhì)粒PCR，結(jié)果一個沒有P出來 ...

我一直用的是酶切鑒定的，我想只要片段對就應(yīng)該是OK的吧，只是我切出來之后片段少了1000，所以我才做的PCR

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5樓2014-10-20 16:44:16

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