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[求助] 菌落PCR能擴(kuò)出帶，為啥質(zhì)粒PCR擴(kuò)不出帶來。菌P很亮的已有4人參與

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1樓 2014-10-11 09:01:35

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去哪里看海

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kx444555: 鼓勵(lì)交流 2014-10-11 11:20:39

菌P確實(shí)會(huì)有不準(zhǔn)確性，亮的條帶是你要的目的條帶嗎？？精提的質(zhì)粒有問題嗎？？跑膠看看質(zhì)粒有沒有提出來吧。

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2樓2014-10-11 09:42:44

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木啦啦

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kx444555: 鼓勵(lì)交流 2014-10-11 11:20:44

如果質(zhì)粒沒有問題的話，可能是因?yàn)榫銹CR是假陽性結(jié)果。

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3樓2014-10-11 10:19:04

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glssg

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我也不懂……難道這就是傳說中的假陽性？

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不安于現(xiàn)在而又安于現(xiàn)在

4樓2014-10-11 10:20:41

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liuruifeng1318

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引用回帖:

2樓: Originally posted by 去哪里看海 at 2014-10-11 09:42:44
菌P確實(shí)會(huì)有不準(zhǔn)確性，亮的條帶是你要的目的條帶嗎？？精提的質(zhì)粒有問題嗎？？跑膠看看質(zhì)粒有沒有提出來吧。

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5樓2014-10-11 11:07:57

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隨風(fēng)飄搖11

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給的信息太少了，一般菌P高亮的話假陽性的可能性就不大了，兩個(gè)問題：1.模板，也就是你的質(zhì)粒提的怎么樣？2.你的PCR反應(yīng)體系，以及程序的問題，這個(gè)可以設(shè)置陽性對照來排除

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天道酬勤

6樓2014-10-11 13:17:04

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zhw2508

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是否來自菌落genome？

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7樓2014-10-11 13:31:19

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yuxiangdan

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會(huì)不會(huì)是質(zhì)粒提取時(shí)有抑制劑帶入抑制PCR,或者PCR質(zhì)粒加的太多

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成功者永不放棄，放棄者永不成功。

8樓2014-10-11 23:37:12

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菌落PCR很亮的話，一般就是陽性克隆了（注意片段大小是否正確），如果抽質(zhì)粒沒錯(cuò)的話，質(zhì)粒PCR應(yīng)該和菌落PCR的體系一樣

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今日你對我愛答不理，明天讓你高攀不起

9樓2014-10-12 20:25:31

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要是提取各方面沒問題的話，應(yīng)該的基因組污染，提取菌液基因組在擴(kuò)增，檢測下是不是基因組污染。如果不是考慮下設(shè)計(jì)引物的特異性。

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10樓2014-10-20 17:27:24

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