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新蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 22
帖子: 7
在線: 10.9小時(shí)
蟲號(hào): 3431680
注冊(cè): 2014-09-18
性別: GG
專業(yè): 病原真菌學(xué)

[求助] 功能基因克隆出現(xiàn)問題

本蟲最近在做一種白腐真菌（木腐菌）的漆酶基因克隆實(shí)驗(yàn)，總RNA的提取、反轉(zhuǎn)錄cDNA都應(yīng)該沒有問題，用LAC保守區(qū)的通用引物PCR也得到了想要的序列，NCBI上比對(duì)沒有問題；但是，接下來我根據(jù)近緣種的漆酶基因cDNA完整序列設(shè)計(jì)了引物，通過PCR、切膠回收、連接和轉(zhuǎn)化，選了3個(gè)陽性克隆子PCR后進(jìn)行測(cè)序，NCBI上比對(duì)，結(jié)果顯示3個(gè)序列都跟漆酶相關(guān)，但是3個(gè)序列不一樣，有很多位點(diǎn)差異，小弟不明白同一個(gè)基因?yàn)槭裁?個(gè)序列會(huì)這樣的不同，另外，3個(gè)序列分別與保守區(qū)序列比對(duì)，也沒有對(duì)上（保守區(qū)序列沒有在全序列中），小弟對(duì)這些結(jié)果感到很迷茫，不知道是什么原因，請(qǐng)各位高手大俠給予指教�。。� 本人不勝感激

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1樓 2014-10-30 23:47:26

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