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maweisimple鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
HRP標(biāo)記抗體 已有4人參與
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大家好，最近做HRP標(biāo)記抗體，參照的是Bioconjugate Techniques,3rd Edition和Thermo的sulfo-SMCC的說明書，可是經(jīng)過ELISA檢測，完全沒標(biāo)上。請問大家有做過這個(gè)標(biāo)記的嗎？是什么樣的流程呢？哪個(gè)步驟是最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)？ 拜托拜托~  |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
maweisimple: 金幣+4, ★★★很有幫助, 簡潔明了，謝謝！ 2014-11-03 13:38:36
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| 1.HRP分子上缺少能反應(yīng)的氨基。2.SMCC是一種異型雙功能基團(tuán)，一端和氨基反應(yīng)，另一端和巰基反應(yīng)。3.天然IgG上也缺少能反應(yīng)的自由巰基，要利用DTT或其他一些試劑修飾出能反應(yīng)的自由巰基。4.一般HRP標(biāo)記IgG，先用高碘酸鈉氧化HRP，產(chǎn)生醛基，醛基能和IgG上富含的氨基生成席弗堿反應(yīng)，從而達(dá)到耦聯(lián)目的。 |
2樓2014-11-03 10:50:37
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4樓2014-11-03 14:22:17
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