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電風(fēng)扇魏哥金蟲 (正式寫手)
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[求助]
雙抗夾心ELISA方法的建立 已有6人參與
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我做雙抗夾心ELISA時(shí)遇到下面的情況,求高手指教“一抗+5%的脫脂奶粉封閉+陰陽血清及空白對(duì)照+自己標(biāo)記的HRP二抗+顯色+終止“,結(jié)果陰性和空白都呈陽性,能不能幫忙分析分析是什么原因造成的?????????? 一抗和二抗都是由本實(shí)驗(yàn)室自己制備的! |
金蟲 (正式寫手)
木蟲 (著名寫手)
待人以誠:專業(yè)/專注/專心

新蟲 (初入文壇)
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第一,你的陰性血清是從哪里來的?這些東西不能自己隨隨便便制備,需要從正規(guī)科研所購買 第二,你的二抗是是否確實(shí)標(biāo)記上了,是否驗(yàn)證能否顯色,可能是你中間的步驟不合理,我們沒有看到這個(gè)關(guān)鍵的標(biāo)記步驟不能隨便下結(jié)論 第三,你的顯色液是否用二抗證明有顯色,如果沒有,可取少量顯色液加入少量二抗證明之 第四,你的包被蛋白用的包被液是什么成分,一般情況下是碳酸鹽 ,另外是否證明已經(jīng)包被上了? [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
新蟲 (初入文壇)
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空白都顯陽性首先確定你這組實(shí)驗(yàn)錯(cuò)誤。 原因第一:加二抗后洗了沒。 第二:如果洗了,那就說明二抗交聯(lián)上去了,有可能封閉液過期了,或者封閉液沒有封閉上(時(shí)間,溫度等)。 第三:很多時(shí)候有一些抗體會(huì)出現(xiàn)一抗與二抗直接交聯(lián)的情況(應(yīng)該很上吧,但我就碰到過一次,實(shí)在洛陽百泰科買的)。 第四:你必須確定你空白是不是加錯(cuò)了。 第五:顯色劑變質(zhì)了,我最開始做的時(shí)候TMB自配就出現(xiàn)過這種問題,它自己都變色了。 如果你的實(shí)驗(yàn)操作正確的話,應(yīng)該是沒封閉好吧(或者你的脫脂奶風(fēng)有問題啊,買點(diǎn)BSA 試試便宜的。其它原因你在做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候很容易就發(fā)現(xiàn)了。 |
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