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kakabada123新蟲 (初入文壇)
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[交流]
上下游引物的設(shè)計(jì)問題 已有3人參與
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上下游引物的設(shè)計(jì)， 最早在NCBI--gene--輸入（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物）空格（基因）方法，未搜出 通過文獻(xiàn)找，找到一篇，問題一：我在copy時(shí)，下游引物抄錯(cuò)了，發(fā)給公司合成，會(huì)出現(xiàn)什么后果？ 問題二：后來，我多看了一些文獻(xiàn)，又發(fā)現(xiàn)一篇文獻(xiàn)，但是同樣動(dòng)物，同樣基因，不同序列。。是怎么回事呢？ |
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kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2014-11-17 10:38:05
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2014-11-17 10:38:05
| 建議你補(bǔ)充一下引物設(shè)計(jì)的基本知識(shí)。問題一的解答：這要看你錯(cuò)的多少了，比如說你引物上有酶切位點(diǎn)，你恰好又COPY錯(cuò)了，那么接下來有關(guān)酶切的實(shí)驗(yàn)步驟你是做不下去的；而如果錯(cuò)誤的區(qū)域是在引物當(dāng)中涉及CDS的區(qū)域，那么一旦影響到編碼的蛋白或者終止密碼子，引物肯定就不能用了的。問題二的解答：引物的設(shè)計(jì)常常以覆蓋基因的CDS區(qū)域?yàn)榛疽�，還跟你將來要插入的質(zhì)粒有關(guān)。所以引物不是一定的，還可以在不影響引發(fā)效率和將來蛋白表達(dá)的情況下做一定堿基的修飾替換。我這樣說肯定說不清，還是建議樓主補(bǔ)充一下相關(guān)方面的知識(shí)，網(wǎng)上關(guān)于引物設(shè)計(jì)的內(nèi)容很多的。 |
2樓2014-11-17 09:47:29
guoliwang
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4樓2014-11-18 11:35:50
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