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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » PCR相關 » 上下游引物的設計問題
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[交流]
上下游引物的設計問題 已有3人參與
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上下游引物的設計， 最早在NCBI--gene--輸入（實驗動物）空格（基因）方法，未搜出 通過文獻找，找到一篇，問題一：我在copy時，下游引物抄錯了，發(fā)給公司合成，會出現(xiàn)什么后果？ 問題二：后來，我多看了一些文獻，又發(fā)現(xiàn)一篇文獻，但是同樣動物，同樣基因，不同序列。。是怎么回事呢？ |
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forever909
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4樓2014-11-18 11:35:50
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kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2014-11-17 10:38:05
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2014-11-17 10:38:05
| 建議你補充一下引物設計的基本知識。問題一的解答：這要看你錯的多少了，比如說你引物上有酶切位點，你恰好又COPY錯了，那么接下來有關酶切的實驗步驟你是做不下去的；而如果錯誤的區(qū)域是在引物當中涉及CDS的區(qū)域，那么一旦影響到編碼的蛋白或者終止密碼子，引物肯定就不能用了的。問題二的解答：引物的設計常常以覆蓋基因的CDS區(qū)域為基本要求，還跟你將來要插入的質粒有關。所以引物不是一定的，還可以在不影響引發(fā)效率和將來蛋白表達的情況下做一定堿基的修飾替換。我這樣說肯定說不清，還是建議樓主補充一下相關方面的知識，網(wǎng)上關于引物設計的內容很多的。 |
2樓2014-11-17 09:47:29
guoliwang
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3樓2014-11-17 21:24:03
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