123n

細(xì)菌最好做絕對(duì)定量，設(shè)計(jì)特異性引物，擴(kuò)增基因上的特異性片段（50-500bp），連接T載體（其它載體也可以），測序正確后，作為標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，來做絕對(duì)定量。有些是拿16SrRNA基因保守區(qū)作為內(nèi)參，做相對(duì)定量。細(xì)菌可以直接用基因組DNA，也可以反轉(zhuǎn)錄后的cDNA，RNA是不能做模板的。

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7樓2014-11-21 20:58:41

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7樓: Originally posted by wanglei512 at 2014-11-21 20:58:41
細(xì)菌最好做絕對(duì)定量，設(shè)計(jì)特異性引物，擴(kuò)增基因上的特異性片段（50-500bp），連接T載體（其它載體也可以），測序正確后，作為標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，來做絕對(duì)定量。有些是拿16SrRNA基因保守區(qū)作為內(nèi)參，做相對(duì)定 ...

絕對(duì)定量也可以估計(jì)一個(gè)基因的表達(dá)量嘛？我用絕對(duì)定量測過一個(gè)基因的拷貝數(shù)！

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8樓2014-11-22 08:53:30

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wanglei512

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8樓: Originally posted by 123n at 2014-11-22 08:53:30
絕對(duì)定量也可以估計(jì)一個(gè)基因的表達(dá)量嘛？我用絕對(duì)定量測過一個(gè)基因的拷貝數(shù)！
...

對(duì)于細(xì)菌，如果你要定量細(xì)菌的個(gè)數(shù)，可以用基因組DNA，如果要定量基因的表達(dá)量可以用CDNA。相對(duì)定量只是基因表達(dá)量相對(duì)內(nèi)參基因的一個(gè)比值，是百分比，絕對(duì)定量是具體到拷貝數(shù)（根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線），有啥不可以。這里標(biāo)準(zhǔn)曲線和內(nèi)參的作用不就是一樣的嗎，兩種方法都是用pcr，都是用相同的引物，都是相同的模板，只是用不同的度量單位表示。

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9樓2014-11-22 12:54:46

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肥貓p

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

絕對(duì)定量求出來的是cDNA的拷貝數(shù)，也就相當(dāng)于RNA的表達(dá)量啊。

相對(duì)定量，我覺得原核里面應(yīng)該也有類似于真核actin的內(nèi)參吧？

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10樓2014-11-23 22:12:06

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