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踏雪無(wú)極限新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
RT-PCR相關(guān)問(wèn)題，新手遇到一些問(wèn)題，比較糾結(jié)，前來(lái)求教？ 已有2人參與
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最近剛剛開(kāi)始做PCR,遇到一個(gè)問(wèn)題，同一個(gè)基因，取蟲(chóng)子的六個(gè)不同組織的cDNA模板，設(shè)計(jì)了三對(duì)不同的引物，其中兩對(duì)擴(kuò)增結(jié)果是一樣的，見(jiàn)圖1,2,另一對(duì)引物比較特別，六個(gè)組織中基因表達(dá)量一點(diǎn)差異都沒(méi)有，見(jiàn)圖3（圖1,2,3都是30個(gè)循環(huán)下，退火溫度50度），對(duì)于第三對(duì)引物我又試了降低循環(huán)數(shù)（25c,27c），提高退火溫度(55,63度)，還是沒(méi)差異， 所以覺(jué)得很奇怪，即便actin也達(dá)不到如此一致，而且第三對(duì)引物擴(kuò)出來(lái)的就是目的片段，做其它實(shí)驗(yàn)時(shí)順便回收測(cè)了序，沒(méi)有問(wèn)題， 那么三對(duì)引物不一樣，到底以哪個(gè)為準(zhǔn)呢？ 圖片1.png 圖片2.png 圖片3.png |
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ixiaoye2012
金蟲(chóng) (小有名氣)
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- 專(zhuān)業(yè): 遺傳學(xué)與生物信息學(xué)
2樓2014-11-24 15:16:55
陸朝軍
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
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- 專(zhuān)業(yè): 生物防治
3樓2015-01-26 21:47:11
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