 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 5438 | 回復: 8 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
霍燁zz銀蟲 (小有名氣)
|
[求助]
腸道粘膜RNA提取總是降解，要崩潰了..... 已有3人參與
|
|
想要做腸道上皮細胞的轉(zhuǎn)錄組測序，做了兩批試驗，結(jié)果腸道粘膜的RNA樣品都不合格 我把第二次的過程貼出來給大家看看，請指教到底有什么地方不合適： 1.樣品制備：將小腸樣品縱向剪開，在預冷過的生理鹽水中漂洗幾次，用濾紙小心吸干，于冰上平皿內(nèi)刮取腸道粘膜，轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中（提前加入0.5ml Trizol），直接放入-80冰箱保存； 2.RNA提取：樣品管加入0.5mlTrizol，使trizol總體積為1ml，漩渦混勻（是粘膜樣，就沒有用液氮磨）。加入200ul氯仿，混勻后12000轉(zhuǎn)離心15min 取上清，加入等體積異丙醇，混勻后-20℃放置20min；12000轉(zhuǎn)離心15min；去掉上清，用75%的酒精（DEPC水配制）洗滌沉淀兩次； RNA樣品晾干至半透明，用DEPC水溶解后-80℃保存 3.電泳鑒定： 用的是1%瓊脂糖+2ul golden view 3ul RNA + 3ul 2X RNA loading dye (65℃，變性10min） 然后120V，跑了20min，結(jié)果是這么個樣子：（上樣量5ul） Nanodrop結(jié)果： RNA電泳圖： 然后送公司鑒定的結(jié)果： 1是D-14，2是D-24 公司說條帶比較模糊，彌散較多，說明已經(jīng)降解了，不適合后續(xù)建庫測序......  師姐給我分析，可能是刮粘膜的過程太費時間了，導致了降解，建議我可以直接取腸段提RNA 可是，我已經(jīng)很小心了，一直都是在冰上操作的，漂洗的生理鹽水也是4℃冰箱提前預冷過的，參考過很多文獻，涉及腸道上皮細胞的，一般都是采取刮粘膜的方式，為什么別人就能做出RNA來，而我卻不行��？？？ 真誠地求教各位，我這該怎么辦��？？ RNA都提不好，后面就沒法做了啊�。�！ 1.png |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有154人回復
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- RNA提取A260/A230低，不到1
已經(jīng)有4人回復
- 請問這兩個RNA提取的怎么樣？是不是降解的嚴重？
已經(jīng)有9人回復
- RNA提取，怎么老是降解？求指導��！
已經(jīng)有24人回復
- 水稻葉片RNA提取
已經(jīng)有5人回復
- 有關細胞總RNA提取
已經(jīng)有16人回復
- 瓊脂糖跑RNA無任何處理 幫我看看 這個圖 RNA是不是降解了？
已經(jīng)有14人回復
- RNA提取，5S很亮，是降解嘛？可否進行后續(xù)半定量實驗？
已經(jīng)有5人回復
- 轉(zhuǎn)錄組測序所需RNA提取
已經(jīng)有14人回復
- 為什么RNA總是降解！
已經(jīng)有40人回復
- 肉雞腸道粘膜提取RNA后跑膠
已經(jīng)有14人回復
- 植物RNA提取，跑出五條帶。并且一直降解，快瘋了�。�！
已經(jīng)有9人回復
- 如果需要買進口的無RNA降解酶的槍頭，一般有哪些廠家��？
已經(jīng)有8人回復
- 【求助/交流】RNA提的不好，基本都降解的話，逆轉(zhuǎn)錄后再PCR會是什么結(jié)果？
已經(jīng)有20人回復
9樓2018-06-21 16:42:11
guoliwang
至尊木蟲 (職業(yè)作家)
- 應助: 140 (高中生)
- 金幣: 13135.3
- 散金: 45
- 紅花: 25
- 帖子: 4963
- 在線: 500.7小時
- 蟲號: 3520910
- 注冊: 2014-11-05
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物化學
2樓2014-12-07 18:55:11
霍燁zz
銀蟲 (小有名氣)
- 應助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 3034.7
- 散金: 204
- 紅花: 2
- 帖子: 239
- 在線: 235小時
- 蟲號: 1873294
- 注冊: 2012-06-30
- 性別: GG
- 專業(yè): 畜牧學
3樓2014-12-07 23:10:37
990104036
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 7 (幼兒園)
- 金幣: 2103.6
- 散金: 710
- 紅花: 2
- 帖子: 308
- 在線: 91.1小時
- 蟲號: 1965302
- 注冊: 2012-08-31
- 性別: MM
- 專業(yè): 畜牧學
4樓2015-01-21 20:50:00
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料292調(diào)劑 +3 | 橘頌思美人 2026-03-23 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 07化學280分求調(diào)劑 +3 | 722865 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 考研化學308分求調(diào)劑 +7 | 你好明天你好 2026-03-23 | 8/400 |
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +4 | LHHL66 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +6 | 冬十三 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +11 | 冷笙123 2026-03-17 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +7 | 懷瑾握瑜l 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[基金申請]
學校已經(jīng)提交到NSFC，還能修改嗎？
 40+4
|
babangida 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +12 | 梁梁校校 2026-03-19 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 22 350 本科985求調(diào)劑，求老登收留 +3 | 李軼男003 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 白QF 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085601調(diào)劑 358分 +3 | zzzzggh 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交大，求調(diào)劑 +5 | 材化逐夢人 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +4 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑 +4 | 小材化本科 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿西安交通大學 學碩 354求調(diào)劑211或者雙一流 +3 | 我想要讀研究生 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 353求調(diào)劑 +3 | 拉鉤不許變 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 廣西大學家禽遺傳育種課題組2026年碩士招生（接收計算機專業(yè)調(diào)劑） +3 | 123阿標 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 收復試調(diào)劑生 +4 | 雨后秋荷 2026-03-18 | 4/200 |
|