 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1935 | 回復(fù): 9 | ||
小六琦琦新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
1700基因的克隆 已有3人參與
|
|
最近在克隆一個(gè)1700bp的基因，引物是根據(jù)轉(zhuǎn)錄組序列設(shè)計(jì)的。因?yàn)槭侨L， 所以引物沒辦法多選，只能是起始密碼子開始，到終止密碼子，但是無論怎么P，都P不出來~然后又做了一個(gè)3’RACE，得到了終止密碼子后面的序列，根據(jù)3‘RACE的序列設(shè)計(jì)下游引物，依然P不出來~ 但是單加一個(gè)全長正（反）引物，與一個(gè)中間位置的反（正）引物一起P，可以擴(kuò)增上游1300bp，下游1200bp的片段， 曾經(jīng)也拿Mix P出過一次1700的全長，但是因?yàn)槭荕ix，有錯(cuò)配，不能用~ 以后拿LA Taq酶P，就再也消失不見了、、、、 但是能證明轉(zhuǎn)錄組序列是對的~ 求各位大神指教，這是為什么呢？下一步該怎么做呢？ 是引物的問題呢？還是模板有高級結(jié)構(gòu)呢？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有201人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 一個(gè)基因做TA克隆后送去測序，不同的單克隆后來結(jié)果不一致，1500bp里有的11個(gè)堿基不同
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 一個(gè)基因DNA序列克隆的意義
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 克隆某一功能基因的全長，要不要做Race？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 克隆基因?yàn)槭裁匆恢边B不到載體上
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 基因克隆失敗原因，求助！
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 怎么使用NCBI克隆基因？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 如何克隆一段1200bp的真核基因，序列來自NCBI
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 怎樣克隆基因家族中的一個(gè)特定基因
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 新基因的克隆和熒光定量表達(dá)比較好發(fā)的SCI雜志
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 單個(gè)基因的克隆和表達(dá)可以發(fā)在什么雜志上
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 已知全長基因怎樣克隆并構(gòu)建表達(dá)載體
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 已知基因全長，克隆構(gòu)建表達(dá)載體
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 克隆基因和載體連接后轉(zhuǎn)化至大腸桿菌，為什么每次涂板都是空平板沒有菌落？
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】基因做表達(dá)實(shí)驗(yàn)必須要克隆全長嗎？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】18s克隆文庫相關(guān)問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助/交流】已知基因序列如何克隆獲得
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助/交流】真菌的基因克隆與表達(dá)
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 克隆基因全長引物設(shè)計(jì)問題
已經(jīng)有32人回復(fù)
2樓2014-12-28 23:26:43
zhaodahe
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 220 (大學(xué)生)
- 金幣: 1796.6
- 紅花: 7
- 帖子: 461
- 在線: 378.5小時(shí)
- 蟲號: 552612
- 注冊: 2008-04-30
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2014-12-29 10:32:51
小六琦琦: 金幣+2, ★有幫助 2014-12-29 19:29:45
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2014-12-29 10:32:51
小六琦琦: 金幣+2, ★有幫助 2014-12-29 19:29:45
|
我覺得你這種情況，可以這樣，在上游1300和下游1200的重疊區(qū)試著找個(gè)酶切位點(diǎn)，通過這個(gè)酶切位點(diǎn)把兩段分別連載體上，得到全長；或者用此兩段同時(shí)做模版，全長的一對引物擴(kuò)增，也許會(huì)比cDNA做模板效果好也不一定。 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
3樓2014-12-29 06:29:26
小六琦琦
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 7
- 帖子: 9
- 在線: 3.4小時(shí)
- 蟲號: 2286038
- 注冊: 2013-02-18
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
4樓2014-12-29 09:28:58
小六琦琦
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 7
- 帖子: 9
- 在線: 3.4小時(shí)
- 蟲號: 2286038
- 注冊: 2013-02-18
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
5樓2014-12-29 09:31:06
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2014-12-29 10:32:55
小六琦琦: 金幣+1, ★有幫助 2014-12-29 19:30:28
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2014-12-29 10:32:55
小六琦琦: 金幣+1, ★有幫助 2014-12-29 19:30:28
| 你這樣試試，先在起始密碼子和終止密碼子處設(shè)計(jì)一對引物，引物序列稍微長一點(diǎn)，不加酶切位點(diǎn)，這樣擴(kuò)增效果可能會(huì)好一點(diǎn)，連到載體上之后再根據(jù)上面二樓仁兄的方法，挑選陽性克隆用加酶切位點(diǎn)的引物擴(kuò)增，如果還是出不來，建議做個(gè)5'RACE在UTR區(qū)設(shè)計(jì)引物再做克隆。 |
6樓2014-12-29 10:31:30
zhaodahe
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 220 (大學(xué)生)
- 金幣: 1796.6
- 紅花: 7
- 帖子: 461
- 在線: 378.5小時(shí)
- 蟲號: 552612
- 注冊: 2008-04-30
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳學(xué)
7樓2014-12-29 10:53:34
小六琦琦
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 7
- 帖子: 9
- 在線: 3.4小時(shí)
- 蟲號: 2286038
- 注冊: 2013-02-18
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
8樓2014-12-29 15:20:02
小六琦琦
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 7
- 帖子: 9
- 在線: 3.4小時(shí)
- 蟲號: 2286038
- 注冊: 2013-02-18
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
9樓2014-12-29 15:25:59
南岸青梔55
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 29.3
- 帖子: 11
- 在線: 3.2小時(shí)
- 蟲號: 14593377
- 注冊: 2019-03-13
- 專業(yè): 細(xì)胞增殖、生長與分化
10樓2019-09-17 16:03:07
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 小六琦琦 的主題更新
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +12 | 申子申申 2026-03-19 | 18/900 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +11 | 冷笙123 2026-03-17 | 11/550 |
|
|
[考研] 材料與化工085600，總分304，本科有兩篇sci參與，求調(diào)劑 +4 | 幸運(yùn)的醬醬 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 315分，誠求調(diào)劑，材料與化工085600 +3 | 13756423260 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +6 | shansx 2026-03-22 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 廣西大學(xué)材料導(dǎo)師推薦 +3 | 夏夏夏小正 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 +5 | @taotao 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿深大，0703化學(xué)，總分302，求調(diào)劑 +4 | 七月-七七 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 313求調(diào)劑 +4 | 肆叁貳壹22 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)求調(diào)劑 +4 | 臨澤境llllll 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +9 | 梁梁校校 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 華東師范大學(xué)-071000生物學(xué)-293分-求調(diào)劑 +3 | 研究生何瑤明 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交大，求調(diào)劑 +5 | 材化逐夢人 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料專碩英一數(shù)二306 +7 | z1z2z3879 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿 西北大學(xué) ，070300化學(xué)學(xué)碩，總分287，雙非一本，求調(diào)劑。 +4 | 晨昏線與星海 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 298-一志愿中國農(nóng)業(yè)大學(xué)-求調(diào)劑 +9 | 手機(jī)用戶 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 081700化工學(xué)碩調(diào)劑 +3 | 【1】 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿福大288有機(jī)化學(xué)，求調(diào)劑 +3 | 小木蟲200408204 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 八6八68 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | 聽風(fēng)就是雨； 2026-03-16 | 3/150 |
|