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BBMC-2012木蟲(chóng) (知名作家)
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[求助]
cDNA克隆問(wèn)題，怎么拉全長(zhǎng)出來(lái) 已有1人參與
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| 樓主是個(gè)菜鳥(niǎo)剛接觸。我現(xiàn)在想得到一個(gè)基因cDNA全長(zhǎng)，我提取RNA反轉(zhuǎn)錄后，做RACE。這樣做后不是只有一段一段產(chǎn)物，但沒(méi)有全長(zhǎng)產(chǎn)物。親們知道這個(gè)全長(zhǎng)產(chǎn)物怎么操作得到的嗎？我以后想把這個(gè)基因克隆出來(lái)，轉(zhuǎn)染用！ |
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做3`-和5`-RACE的目的就是獲取基因cDNA全長(zhǎng)序列的兩端序列，然后拼接獲得完整的cDNA全長(zhǎng)序列，有了全長(zhǎng)序列后，根據(jù)你想擴(kuò)增的片段，比如完整閱讀框，設(shè)計(jì)上下游引物，用3`-RACE的模板或重新提RNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物作為模板進(jìn)行PCR就獲得了你要的基因，之后就可以構(gòu)建質(zhì)粒往下做實(shí)驗(yàn)了。 [ 發(fā)自小木蟲(chóng)客戶(hù)端 ] |
3樓2015-01-09 00:43:46
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9樓2015-01-13 22:48:48
sandycool
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10樓2016-03-04 19:03:14
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