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關(guān)于羧基聚苯乙烯微球偶聯(lián)抗體后的穩(wěn)定性問題 已有1人參與
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| 0.2um的羧基聚苯乙烯微球，通過EDC活化后偶聯(lián)一個抗體，微球抗體復(fù)合物4度保存穩(wěn)定性差。主要是4度保存后熒光信號會明顯高于剛稀釋好的微球的熒光信號，分析原因是聚苯乙烯微球的疏水作用，靜電作用等可能導(dǎo)致微球包被抗體后發(fā)生部分凝集（肉眼不可見的凝集），通過優(yōu)化標(biāo)記抗體的濃度，緩沖液pH，EDC用量等均未能改變微球抗體復(fù)合物4度保存熒光信號升高的問題，望各位蟲友給點好建議啊！如何穩(wěn)定保存！ |
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 小木蟲 |
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youjihuaxue2000
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
王雨云: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝！ 2015-02-02 12:59:55
王雨云: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝！ 2015-02-02 12:59:55
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200nm熒光，你是做免疫層析嗎？造成不穩(wěn)定的原因復(fù)雜，但都能歸結(jié)為微球表面電荷被平衡掉了。兩微球靠彼此之間的電荷斥力分開，使整個體系維持溶膠狀態(tài)。從EDC的加入開始，這種電荷平衡就被打破，后面加入抗體、封閉劑的時候，如果不能回復(fù)電荷平衡，體系就是不穩(wěn)定的。所以，不妨試試：（1）選擇表面電荷更多的微球，EDC只活化部分羧基，剩下部分來提供負(fù)電荷；（2）選擇帶同種電荷的blocker。（3）還得找個有經(jīng)驗的人手把手教你，細(xì)節(jié)很重要，呵呵。 歡迎交流huxuhua2008@163.com [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
2樓2015-02-02 08:00:03
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pH越高標(biāo)記后的微球抗體復(fù)合物活性越低，6左右確實標(biāo)記出來的微球抗體復(fù)合物活性很高，但仍改變不了2-8度保存熒光信號增強的問題。羧基微球理論上在沒有EDC存在的情況下也應(yīng)該可以跟帶氨基的抗體反應(yīng)才對，至于穩(wěn)定不穩(wěn)定就很難說了。目前我的實驗是通過EDC活化后化學(xué)交聯(lián)抗體的，2-8度保存穩(wěn)定性還是有問題。2-8度保存后的變化規(guī)律一般是先明顯升高后總體保持不變，37度熱破壞5天內(nèi)還不容易出現(xiàn)信號減弱的情況。有的人就是通過標(biāo)記完成后先熱破壞再來驗證穩(wěn)定性的。 |
5樓2015-02-03 08:49:07
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
8樓2015-03-02 22:02:00
3樓2015-02-02 13:21:12
youjihuaxue2000
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4樓2015-02-03 07:44:46
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商家已經(jīng)主動聲明此回帖可能含有宣傳內(nèi)容|
您提到：（1）熒光信號增強。很可能熒光物質(zhì)泄漏出來，直接和蛋白質(zhì)相互作用了，可能兩者存在能量共振轉(zhuǎn)移，這會使熒光增強。你不妨問問廠家，微球里面的熒光染料是不是疏水的？并仔細(xì)觀察：（a）體系是否用了極性較強的有機物？（b）試劑瓶壁或表面是否有一層油一樣的東西？（2）羧基微球理論上在沒有EDC存在的情況下也應(yīng)該可以跟帶氨基的抗體反應(yīng)。是的，通過離子鍵相互作用，但很弱。實際上，即使有EDC活化的情況下，微球首先通過被動吸附和蛋白相互作用，然后才發(fā)生共價交聯(lián)。這些非共價的結(jié)合，是后來不穩(wěn)定的根源之一。你不妨在封閉后加一步3~5min的超聲，那些不穩(wěn)定的結(jié)合，自然會脫離下來。 [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
6樓2015-03-01 01:42:06
7樓2015-03-02 17:10:55
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9樓2015-09-17 17:20:02
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10樓2016-07-06 10:17:52
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