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anona銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
DNA ＯＤ值２６０／２３０＜１ 已有2人參與
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師兄四個月之前提取的腸道微生物DNA，保存在負２０度，濃度在50~300，ＯＤ260/280在２～２.２,，ＯＤ２６０／２３０在２～３之間，現(xiàn)在我準(zhǔn)備做熒光定量ＰＣＲ，檢測ＤＮＡ２６０／２３０都＜１，２６０／２８０在２.１～２.３之間，求助，實驗還能做嗎？有什么補救的方法嗎？小白求指教。 |
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anona
銅蟲 (初入文壇)
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4樓2015-01-12 22:11:27
781055707
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沒事，接著做。２６０／２８０在２.１～２.３之間這個正常就行。 A260/A280和A260/A230 是核酸純度的指示值。純度好的DNA或RNA，在pH7-8.5 下A260 / A280的比值應(yīng)該在2.0 或2.5。 純凈的樣品比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物、鹽（胍鹽）等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0 。 當(dāng) 0.5％BSA蛋白質(zhì)污染時，蛋白污染會導(dǎo)致260和280的數(shù)值都下降，其凈結(jié)果是260/280比值下降，但260/280的比值變化并不顯著，正如分子克隆3所說。但蛋白殘留會導(dǎo)致230的數(shù)值顯著上升，顯著影響260/230的比值。也就是說，如果RNA樣品的260/280＝1.7，260 /230＝0.5，那么就應(yīng)該考慮污染原因不是胍鹽殘留，而是蛋白殘留 |
2樓2015-01-09 09:19:57
3樓2015-01-12 19:58:46
anona
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5樓2015-01-12 22:11:35
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