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張永婧1991新蟲 (初入文壇)
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[求助]
高通量測序與T-RFLP的結(jié)合
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本人做的是豬腸道微生物多樣性,是個新手,有很多問題需要請問大師們。 1、做T-RFLP用通用引物擴(kuò)增細(xì)菌組總DNA的保守區(qū),然后酶切,根據(jù)片段數(shù)據(jù)庫對比找到對應(yīng)菌群,這個工作已經(jīng)完成了,但疑問是發(fā)文章用數(shù)據(jù)庫比對可靠嗎?應(yīng)該是要跟測序?qū)Ρ劝?那么問題又來了,我看零幾年發(fā)的文章大多數(shù)就是用通用引物擴(kuò)增保守區(qū)后克隆測序,拿回來的數(shù)據(jù)再找對應(yīng)菌,這個測序是全序列測序嗎?拿回來數(shù)據(jù)能跟酶切數(shù)據(jù)比對嗎?現(xiàn)在用這個還能發(fā)好一點(diǎn)的文章嗎? 2、導(dǎo)師想法是做個高通量測序,因?yàn)槲覀儗?shí)驗(yàn)室以前沒做過這方面的東西,弄得也是頭大。我的問題就是,高通量測序應(yīng)該測得都是可變區(qū),得出結(jié)果后跟我酶切的保守區(qū)有什么內(nèi)在聯(lián)系呢?這兩個方法能同時聯(lián)系來說明多樣性的問題嗎?如果不做高通量,根據(jù)酶切所得的不是很可靠的結(jié)果,做定量PCR能驗(yàn)證嗎?但是做多樣性的話,定量需要定很多菌種吧? 好多問題啊,希望大神們能給多給點(diǎn)指點(diǎn),感覺一入分子深似海,從此畢業(yè)是路人! |

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1、現(xiàn)在都是測序后 和數(shù)據(jù)庫在比對的 結(jié)果 2、你測序的結(jié)果也是 需要跟數(shù)據(jù)庫比對才能找到對應(yīng)的細(xì)菌種屬啊 3、高通量 用的是 保守區(qū)的引物 去擴(kuò)增可變區(qū),你是16S rRNA測序吧 這個是擴(kuò)增子測序 相對好做一些 4、多樣性的問題 就是測序后再比對后 得到的菌群結(jié)構(gòu) 5、一般大家都是用qPCR驗(yàn)證測序結(jié)果的 只需要做幾個有差異的種屬即可 |

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