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95846713新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
pet28a pet32a蛋白表達(dá)大小計(jì)算問(wèn)題
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本人目的條帶701bp （在182氨基酸遇見(jiàn)第一個(gè)終止密碼子，第206氨基酸遇見(jiàn)第一個(gè)起始密碼子）連接pet28a和pet32a 做蛋白表達(dá)，用的是載體上的起始密碼子，但發(fā)現(xiàn)兩個(gè)載體跑出來(lái)的蛋白大小不一樣，用pet28a載體表達(dá)跑出來(lái)26KD左右，用pet32a表達(dá)出來(lái)是38KD，是不是載體起始密碼子不同位置的原因��？ pet28a的起始密碼子是不是Nco I的ATG��？ pet32a的起始密碼子是Trx*tag的TAG還是Nco I的ATG�。� 另外我的目的片段的第182個(gè)氨基酸（位于544bp-546bp）是TGA 終止密碼子，請(qǐng)問(wèn)終止密碼子之后過(guò)了一段若是還有起始密碼子還翻譯嗎？ 我是這樣算的 [ 載體上起始密碼子開(kāi)始翻譯的氨基酸開(kāi)始算到酶切位點(diǎn)翻譯的氨基酸數(shù)+目的片段翻譯的氨基酸數(shù)（截止到第一個(gè)終止密碼子）]×110 算蛋白大小對(duì)嗎？算出來(lái)的蛋白再和page圖對(duì)比對(duì)嗎？ 發(fā)現(xiàn)用pet28a跑出的條帶比算出來(lái)的偏大 |
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