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95846713新蟲 (初入文壇)
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[求助]
pet28a pet32a蛋白表達大小計算問題
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本人目的條帶701bp （在182氨基酸遇見第一個終止密碼子，第206氨基酸遇見第一個起始密碼子）連接pet28a和pet32a 做蛋白表達，用的是載體上的起始密碼子，但發(fā)現(xiàn)兩個載體跑出來的蛋白大小不一樣，用pet28a載體表達跑出來26KD左右，用pet32a表達出來是38KD，是不是載體起始密碼子不同位置的原因�。� pet28a的起始密碼子是不是Nco I的ATG��？ pet32a的起始密碼子是Trx*tag的TAG還是Nco I的ATG�。� 另外我的目的片段的第182個氨基酸（位于544bp-546bp）是TGA 終止密碼子，請問終止密碼子之后過了一段若是還有起始密碼子還翻譯嗎？ 我是這樣算的 [ 載體上起始密碼子開始翻譯的氨基酸開始算到酶切位點翻譯的氨基酸數(shù)+目的片段翻譯的氨基酸數(shù)（截止到第一個終止密碼子）]×110 算蛋白大小對嗎？算出來的蛋白再和page圖對比對嗎？ 發(fā)現(xiàn)用pet28a跑出的條帶比算出來的偏大 |
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