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wwjinx新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
片段克隆問(wèn)題 已有2人參與
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| 各位大神，這一兩個(gè)月我做連接DNA片段到T載體里送出去測(cè)序，測(cè)序公司總是活化培養(yǎng)不出我送的菌液，我的片段大小分別為200-800之間，T載體為PMA19-T，感受態(tài)為T(mén)op10，IPTG和X-gal均沒(méi)問(wèn)題。送出菌液之前，搖培時(shí)間4,、6、8、10、12和16小時(shí)都試過(guò)，菌液里分別加30%甘油和不加甘油也都試過(guò)了。這是什么原因？？？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wwjinx(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-01-14 20:13:47
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wwjinx(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-01-14 20:13:47
| 送菌液之前，先用通用引物或者你自己的特異引物做一次菌液PCR，最好是用通用引物上游+特異引物下游做一次菌液PCR，驗(yàn)證陽(yáng)性克隆，再送出去測(cè)序。如果擔(dān)心測(cè)序公司搖不好，你也可以自己把質(zhì)粒提出來(lái)，送質(zhì)粒去測(cè)序。當(dāng)然，你也可以送PCR產(chǎn)物去測(cè)序（確認(rèn)條帶單一）或是自己切膠，送純化后的PCR產(chǎn)物測(cè)序。 |
2樓2015-01-13 14:07:38
korchagin
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3樓2015-01-13 16:12:45
wwjinx
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4樓2015-01-13 18:11:21
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5樓2015-01-13 20:58:43
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