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wenzi6337木蟲 (著名寫手)
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[求助]
求助關(guān)于his標(biāo)簽的ip 已有2人參與
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我準(zhǔn)備用表達(dá)的his融合蛋白釣取細(xì)胞裂解液中與之相互作用的蛋白, 設(shè)想是先將大腸桿菌中表達(dá)的蛋白用his-band純化, 再用純化的蛋白和細(xì)胞裂解液孵育, 用his的單抗掛孵育獲得的復(fù)合體蛋白, 再用蛋白A掛his的抗體(含his抗體,his融合蛋白和與之相互作用蛋白), 最后用銀染分離蛋白, 打質(zhì)譜鑒定與我的his融合蛋白相互作用的蛋白。 請問各位蟲友我的設(shè)計(jì)是否可行? 謝謝! |
木蟲 (著名寫手)
銀蟲 (正式寫手)
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搞這么麻煩,搭橋搭這么多,為啥不嘗試用Ni-NTA-瓊脂糖bead結(jié)合大腸桿菌中的his融合蛋白,然后加washing buffer清洗瓊脂糖bead,將bead加入到細(xì)胞裂解液例,孵育,然后再次washing,washing,washing,然后加入洗脫buffer,加loading buffer制樣跑PAGE? 全程在一個(gè)EP管中操作,多簡單啊。 |
銀蟲 (正式寫手)
禁蟲 (初入文壇)
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