 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2087 | 回復: 22 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
[求助]
求助PCR擴增不出來的問題..... 已有11人參與
|
||
|
最近做分子實驗PCR，總是做不出來，不知道哪位大俠能夠指點一下.... PCR反應總體系為20 ul，其中包含： DNA（10 ng/ul） 3ul ； Primers（2 uM）上下游各3ul； Taq酶（5U/ul） 0.2ul； dNTP（1mM） 4ul ； 10Xbuffer（含Mg2+，1Xbuffer中含2mM） 2ul； ddH2O補齊至20ul。 該體系用做擴增葉綠體DNA時，完全沒問題，但是在擴增核基因時，僅擴增出一次，就再也沒擴增出來了。從擴增效果看，也并不是特別理想。以前做的時候，是用的公司提供的預混液mix，只需加入DNA、primers、Taq，拿水補齊就行了，且擴增結(jié)果穩(wěn)定�，F(xiàn)在用同樣的擴增程序，可擴增結(jié)果怎么都出不來。試了很多次，更換引物（新合成的引物）、增加引物濃度（終濃度為0.3、0.5、1uM的都試過）、更換dNTP、更換DNA、增加DNA模版濃度（體系中30ng、40ng、50ng的都試過），但最終都是無結(jié)果。PCR擴增程序沒問題的，因為之前用預混液做出來有結(jié)果的。只是現(xiàn)在沒有條件了，沒有再購買預混液了。 另外，不知道水是不是有問題？我做葉綠體基因的時候，擴增結(jié)果良好，擴增圖譜比較清晰，但用同樣的體系，只是更換引物，沒有更換水，結(jié)果怎么都做不出來了，求大神幫忙..... |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有111人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
-
留學--博士招生
已經(jīng)有16人回復
-
化學工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復
-
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 枯草芽孢桿菌PCR擴增不出來的問題
已經(jīng)有16人回復
- 反向PCR擴不出來
已經(jīng)有4人回復
- 高GC模版擴增不出條帶，求PCR高手
已經(jīng)有5人回復
- 請問大家PCR擴增的最長產(chǎn)物是多少bp
已經(jīng)有10人回復
- 模版GC含量高，二級結(jié)構(gòu)復雜，PCR擴不出來
已經(jīng)有5人回復
- 競爭性等位特異性PCR擴增不出條帶
已經(jīng)有8人回復
- PCR大片段問題
已經(jīng)有15人回復
- PCR擴增DNA序列無條帶
已經(jīng)有46人回復
- 熒光定量PCR設計了三對引物了，都擴增不出來，郁悶啊
已經(jīng)有4人回復
- 進行點突變的pcr，不能擴增出產(chǎn)物
已經(jīng)有3人回復
- RT-PCR的cDNA不能擴增出目的條帶，只有內(nèi)參基因能擴增出來
已經(jīng)有14人回復
- PCR重復不出來
已經(jīng)有20人回復
- 大片段PCR(2.1K)擴增求助
已經(jīng)有12人回復
- 大片段PCR擴增求助
已經(jīng)有34人回復
- overlap PCR做不出來吶。。。。
已經(jīng)有23人回復
- 反向PCR之單引物擴增，真悲劇
已經(jīng)有15人回復
- 求助 土壤基因組 PCR 擴增問題
已經(jīng)有30人回復
- PCR擴增出現(xiàn)的問題
已經(jīng)有9人回復
- 求助！PCR擴增不出全長DNA序列怎么辦？
已經(jīng)有24人回復
- 【求助/交流】PCR擴增核心片段，再也擴不出來了，怎么辦
已經(jīng)有16人回復
水無月小白
金蟲 (初入文壇)
- 應助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1913.9
- 帖子: 28
- 在線: 28.8小時
- 蟲號: 1162310
- 注冊: 2010-12-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 食品科學基礎
9樓2015-01-23 09:29:35
紅衛(wèi)大兵
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 177 (高中生)
- 金幣: 1875.1
- 散金: 174
- 紅花: 8
- 帖子: 358
- 在線: 167.5小時
- 蟲號: 2147864
- 注冊: 2012-11-26
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物進化生物學
2樓2015-01-21 22:46:14
3樓2015-01-22 00:08:21
18761615793
木蟲 (正式寫手)
小蟲
- MolEPI: 1
- 應助: 172 (高中生)
- 金幣: 646.4
- 散金: 170
- 紅花: 16
- 帖子: 863
- 在線: 144.9小時
- 蟲號: 3603131
- 注冊: 2014-12-19
- 專業(yè): 抗體工程學
4樓2015-01-22 11:04:07
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +3 | dfffsar 2026-03-29 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿雙一流機械285分求調(diào)劑 +4 | 幸運的三木 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭州大學，080500學碩，總分317分求調(diào)劑 +8 | 舉個栗子oi 2026-03-24 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +4 | 種圣賜 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料學碩333求調(diào)劑 +11 | 北道巷 2026-03-24 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 305求調(diào)劑 +8 | RuiFairyrui 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +13 | zhn03 2026-03-25 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +5 | 舊吢 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 蘆lty 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085405 考的11408求各位老師帶走 +3 | Qiu學ing 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 331環(huán)境科學與工程求調(diào)劑 +3 | 熠然好運氣 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 315分求調(diào)劑 +7 | 26考研上岸版26 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +4 | AZMK 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料292調(diào)劑 +12 | 橘頌思美人 2026-03-23 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +5 | Pigcasso 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[論文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3 | Russ_ss 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑。有半年電池和半年高分子實習經(jīng)歷 +10 | 材料學257求調(diào)劑 2026-03-23 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 342求調(diào)劑 +3 | 加油a李zs 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 341求調(diào)劑 +7 | 青檸檬1 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 300分，材料，求調(diào)劑，英一數(shù)二 +5 | 超贊的 2026-03-24 | 5/250 |
|